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1实验目的本实验通过观察斜刺对一次急性离心运动骨骼肌损伤模型大鼠线粒体及胞浆中Ca2+含量、血清CK、骨骼肌组织中MPO和肌力的影响,探讨针刺促进骨骼肌损伤修复的作用机制。2实验方法实验一:96只雄性Wistar大鼠随机分为4组:安静对照组(C,n=8)、运动组(E,n=40)、运动针刺组(EA,n=40)与运动针刺阻断剂组(EAI,n=40)。采用-16°下坡跑90min建立一次性急性离心运动模型。运动针刺组采用阿是穴斜刺干预,运动针刺阻断剂组采用针刺联合Gd Cl3注射干预,安静组和运动组不干预。分别于运动后6 h、24 h、48 h、72 h、120 h对实验大鼠进行股四头肌(主要为股中间肌和股内肌)损伤部位取材,检测骨骼肌线粒体中Ca2+含量;检测骨骼肌肌肉组织中MPO、血清CK含量。实验二:24只雄性Wistar大鼠随机分成4组:安静对照组(C,n=6)、电刺激组(E,n=6)、电刺激针刺组(EA,n=6)、电刺激针刺阻断剂组(EAI,n=6)。采用电刺激大鼠斜方肌建立过度离心运动损伤模型。活体大鼠暴露斜方肌,拉长后进行电刺激,肌肉收缩(过程相当于离心运动)。电刺激采用,波宽700 ms;电压8 V;频率100 Hz;每次电刺激3 s,50次(即150s为一组);刺激一次后休息5 min,共测10组。安静组不进行电刺激。电刺激组进行电刺激;电刺激针刺组于刺激结束后进行针刺(用直径0.25 mm毫针刺斜方肌,留针4 min);电刺激针刺阻断剂组于刺激结束后进行针刺。所有组在刺激进行试剂孵育并记录肌张力变化。取活体斜方肌拍摄肌肉组织Ca2+荧光图片,取离体斜方肌线粒体Ca2+的测定。3实验结果实验一3.1不同组别大鼠血清中CK活性,与对照组相比,E组24 h有显著增加,有极显著性差异(P<0.001);48 h时有非常显著性差异(P<0.01),120 h降至安静组水平;EA组24 h达到峰值,且有显著性差异(P<0.05),48 h至120 h一直下降至安静组水平;EAI组,6 h即有非常显著性差异(P<0.01),24 h、48 h、120 h有极显著性差异(P<0.001),120h虽然下降,但高于E和EA组。每个时间点,EA、EAI与运动组相比,24 h EA和48 h EA与其有显著性差异(P<0.05),6 h EAI和48 h EAI与其有显著性差异(P<0.05)。EAI与EA相比,在24 h有显著性差异(P<0.05),在6 h和120 h有非常显著性差异(P<0.01),在48 h和72 h有极显著性差异(P<0.001)。EA与EAI组在每个时间点上,除24 h有显著性差异外(P<0.05),都有非常显著性差异(P<0.01)。3.2不同组别大鼠股中间肌髓过氧化物酶浓度,与对照组相比,6 h EAI、6 h E、24 h E、24 h EAI和72 h EAI有显著性差异(P<0.05);48 h EAI有非常显著性差异(P<0.01);6 h EA有极显著性差异(P<0.001)。每个时间点上,其他组与运动组相比,24 h EA和72 h EAI有显著性差异(P<0.05);6 h EA和48 h EAI有非常显著性差异(P<0.01)。每个时间点上,EA与EAI相比,在48 h有非常显著性差异(P<0.01),在72 h有显著性差异(P<0.05)。各组别在120 h基本恢复正常水平。3.3不同组别大鼠股四头肌线粒体中游离Ca2+,与对照组相比,24 h EA和24 h EAI有显著性差异(P<0.05);24 h EA和48 h EAI有非常显著性差异(P<0.01);6 h EA有极显著性差异(P<0.001)。每个时间点上,其他组与运动组相比,48 h EAI有显著性差异(P<0.05);6 h EA有极显著性差异(P<0.001)。每个时间点上,EA与EAI相比,在6 h有非常显著性差异(P<0.01),在48 h有显著性差异(P<0.05)。各组别呈先上升后下降趋势,在120 h基本恢复正常水平,但是其峰值出现的时间E、EA、EAI分别出现在24 h、6 h和48 h,且峰值大小为EA>E>EAI。实验二3.1钙离子荧光图片显示,对照组(C)中,肌纤维荧光强度较弱,肌纤维在灰度图像下不明显,胞浆中无明显荧光。电刺激组(E),肌纤维明显,且胞浆中荧光很强,可视区域内大部分肌纤维很多具有较强荧光,且有零星荧光亮点。电刺激针刺组(EA),大部分肌纤维荧光强度降低,且荧光亮点很多。运动针刺加阻断剂组(EAI),肌纤维明显,单根肌纤维荧光较强。荧光图片平均灰度值显示,不同组别大鼠斜方肌胞浆中游离钙离子浓度,与对照组相比,E有极显著性差异(P<0.001);与E相比,EA与EAI有非常显著性差异(P<0.01)。3.2大鼠斜方肌线粒体中游离钙离子浓度,与对照组相比EA有非常显著性差异(P<0.01);与E相比,EA有非常显著性差异(P<0.01);与EA相比,EAI有非常显著性差异(P<0.01)。3.3大鼠斜方肌肌张力,与对照组相比,电刺激90 min后,E、EAE、AI均有非常显著性差异(P<0.01);100 min时E、EAI有显著性差异(P<0.05)。100 min时,与E相比,EA有显著性差异(P<0.05);与EA相比,EAI有显著性差异(P<0.05)。4结论4.1离心收缩运动引起骨骼肌胞浆Ca2+的升高,血清CK活性升高,中性粒细胞产物MPO活性升高。4.2针刺可有效地降低胞浆Ca2+过载现象,促进线粒体吸收Ca2+,线粒体Ca2+升高继而诱发炎症反应,加快损伤组织修复。4.3针刺通过激活牵张激活通道,激活线粒体摄钙,减轻胞浆Ca2+过载,进而诱发一列炎症反应,从而发挥损伤修复作用的。