【摘 要】
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钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)是目前所知的唯一一种活性受Ca2+/CaM调节的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它在免疫调节、学习记忆和细胞信号转导等方面都发挥重要的作用,并且与老年性痴呆
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钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)是目前所知的唯一一种活性受Ca2+/CaM调节的Ser/Thr蛋白磷酸酶,它在免疫调节、学习记忆和细胞信号转导等方面都发挥重要的作用,并且与老年性痴呆症(AD),类风湿性关节炎等自身免疫疾病等的发生有关。
利用实验室建立的基于酶活力测定的药物筛选分子模型,通过渗漉、正反相硅胶柱层析法、凝胶柱层析法及制备型高效液相色谱法JHH中筛选出对CN有激活作用的一个单体化合物Ⅵ和三个具有极性代表性的有效部位。
单体化合物Ⅵ经由质谱法和核磁共振波谱法鉴定,确定为GA。GA在以pNPP为底物时,对BA有明显激活作用,最高相对激活率可达132.3%(浓度为10μg/mL);在以RII为底物时,GA对CNA的最高相对激活率可达142.9%(25μg/mL)。
三个极性代表部位分别为LP、MP、HP。其中LP在以pNPP为底物时,对CNA的最高相对激活率可达120.5%,经化学鉴定,初步确定其主要成分为黄酮苷及其苷元。MP部位以pNPP为底物时,对CNA的最高相对激活率可达128.0%,经化学鉴定,初步确定其主要成分为皂苷类。HP在以pNPP为底物时,对CNA的最高相对激活率可达152.1%,经化学鉴定,初步确定其主要成分为寡糖。
U937细胞增殖实验结果显示,LP在0.01μg/mL、0.1μg/mL和1.0μg/mL下,对U937细胞增殖的刺激指数均在150%以上。HP在0.001μg/mL、0.01μg/mL、0.1μg/mL下,对U937细胞增殖均呈现促进作用,最高刺激指数可达166%,但在1.0μg/mL下,则表现为抑制作用。而MP在上述四种浓度下,对U937细胞增殖均不表现促进作用,反在1.0μg/mL下表现为抑制作用。
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