血瘀证指瘀血内阻,它的发生与凝血功能异常有密切的关联,可以表现为血小板聚集异常增强以及凝血功能活化。药对是两种中药配伍用药的基本形式,可以实现增强、协同、抑制或相互拮抗等作用。对药对的探究不仅能够反映单味药在复方中的作用,也可用于探究复方药物间的相互作用,深入研究其配伍规律。本论文旨在建立谱效关系分析方法用于筛选活血化瘀中药药对丹参-红花发挥活血化瘀、抑制酪氨酸酶以及抗氧化作用的主要活性成分,对活性成分之间代谢的相互影响进行了初步探究,并建立斑马鱼血栓模型用于活性成分药效的初步评价。论文一共包括以下七个部分(章节):第一部分为文献综述部分,首先简要阐述了丹参-红花药对的化学成分及药理作用,然后概述了谱效关系的研究及其数据处理方法,简要介绍了斑马鱼的研究现状,最后提出了本论文的研究目的以及研究内容。第二部分建立谱效关系分析方法用于筛选丹参-红花药对中的活血作用活性成分。首先采用回流提取法对不同比例(1:1、2:1、3:1、5:1、1:5、1:3)丹参-红花进行提取;同时,以冰水浴法建立大鼠血瘀模型,以0.9%生理盐水为空白对照,以抗凝血实验比较不同比例丹参-红花提取物的体内药理作用,采用典型相关分析(CCA)将药理实验结果数据与药对液相图谱(峰面积)进行谱效学分析。结果筛选出15个潜在活性成分,鉴定出8个成分的化学结构,并对其中5个单体成分进行体外活性验证。实验结果表明,所建立的谱效学筛选方法可快速、有效地筛选丹参-红花活血作用的主要活性成分,其中咖啡酸、丹酚酸B、羟基红花黄色素A和紫草酸等单体被证实具有显著的活血作用,可为其临床用药的开发提供实验依据。第三部分采用谱效关系分析方法筛选丹参-红花药对中抑制酪氨酸酶的活性成分。首先采用回流提取法对不同比例(1:1、2:1、3:1、5:1、1:5、1:3、1:2)丹参-红花进行提取;同时,以曲酸为阳性对照,以抑制率比较不同比例丹参-红花提取物抑制酪氨酸酶的活性,采用典型相关分析(CCA)将抑制实验结果与药对液相图谱(峰面积)进行谱效学分析,并利用分子对接技术对活性成分与酪氨酸酶的活性位点进行预测。结果筛选出16个潜在活性成分,鉴定出13个成分的化学结构,并对其中5个单体成分进行体外活性验证。实验结果表明,原儿茶醛、丹参酮IIA和羟基红花黄色素A具有显著的酪氨酸酶抑制作用,并且其部分活性位点与阳性药曲酸相同。实验结果证实了谱效分析方法能有效地筛选复杂体系中的酶抑制活性成分,并且这些活性化合物的结构特点也可为其他酪氨酸酶抑制剂的发现提供参考。第四部分采用谱效关系分析方法筛选丹参-红花药对中抗氧化的活性成分。首先采用回流提取法对不同比例(1:1、2:1、3:1、5:1、1:5、1:3、1:2)丹参-红花进行提取;同时,以维生素C为阳性对照,以对DPPH的清除率比较不同比例丹参-红花提取物的抗氧化活性,采用典型相关分析(CCA)将清除率与药对液相图谱(峰面积)进行谱效学分析。结果筛选出18个潜在活性成分,鉴定出13个成分的化学结构,并对其中8个单体成分的抗氧化作用进行了体外验证。实验结果表明,咖啡酸、芦丁、羟基红花黄色素A、丹参素、原儿茶酸、丹酚酸A以及绿原酸这些单体具有显著的抗氧化活性。第五部分探究筛选出的活性单体成分在斑马鱼体内代谢的相互影响。首先通过LC-MS分析初步鉴定了丹参酮IIA、丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛以及羟基红花黄色素A在斑马鱼体内的代谢产物,然后通过单药及混合用药后代谢产物含量的变化分别探讨了红花中的成分羟基红花黄色素A对丹参中的成分丹参酮IIA、丹参素、丹酚酸B、原儿茶醛的代谢影响(促进或抑制),最后总结分析了这些成分的代谢特征和代谢相互影响。实验结果可为丹参-红花药对相互作用研究提供参考。第六部分是建立斑马鱼血栓模型评价丹参-红花药对中筛选出的活性单体成分的药效。首先以苯肼为诱导剂建立斑马鱼血栓模型,然后以纯水为空白对照,以阿司匹林为阳性对照,评价筛选出的活性成分如原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B等的抗血栓药效,最后对斑马鱼尾静脉血栓染色面积进行了半定量分析。结果表明,与空白组相比,模型组斑马鱼尾静脉有大量血栓形成;与模型组相比,阳性药物组形成少量血栓,其他各活性成分组均有不同程度的抗血栓效果,其中原儿茶醛、咖啡酸和羟基红花黄色素A抗血栓效果最为显著。这些实验结果证实了以苯肼为诱导剂建立的斑马鱼血栓模型可用于筛选抗血栓药物,且这种模型具有建模容易、耗费少和易于观察等特点;另一方面,实验结果验证了原儿茶醛等六个成分具有良好的抗血栓作用,为临床应用提供了一定的参考。第七部分为结论与展望。本论文首先采用谱效学分析方法筛选了丹参-红花药对中活血化瘀、抑制酪氨酸酶以及抗氧化作用的活性成分,并对筛选出的成分进行活性验证;然后探究了红花中的成分对丹参中的成分在斑马鱼体内代谢的影响,为丹参-红花药对协同作用机制的探究提供了参考;最后建立斑马鱼血栓模型评价了丹参-红花药对中筛选出的活性成分的药效,为其临床用药提供了实验依据。