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MARCHs(membrane associated RING-CH proteins)是一类膜E3泛素连接酶。该类蛋白的N端含有C4HC3RING-finger结构域，能够结合E2结合酶，泛素化修饰底物分子。目前该家族共发现11个成员，MARCH8属于胞内MARCH家族的一员，能够下调MHC(major histocompatibility complex)Ⅱ，CD86和IL(interlukin)-1受体辅助蛋白等多种细胞膜蛋白的表达，是一种重要的免疫调节蛋白。 近年研究发现，MARCH8具有抗病毒活性。最初，通过siRNA筛选实验发现MARCH8是一种抗HIV的宿主限制因子;后续研究发现，MARCH8能够抑制VSV和HIV复制。MARCH8通过介导病毒包膜蛋白内吞，减少病毒颗粒中包膜蛋白插入，降低病毒感染性，提示MARCH8可能具有广谱抑制包膜病毒的作用，但是MARCH8对其它包膜病毒的作用及机制并不清楚。IAV(InfluenzaAvirus)是一种常见的呼吸道包膜病毒，除引起每年的季节性流行外，IAV还曾引起过数次大爆发，导致严重的人员伤亡和社会恐慌。因为潜在大流行风险，IAV一直是病毒学、免疫学和传染病学的研究热点和重点。 本文选用IAV作为研究对象，探索MARCH8对病毒复制的影响，发现MARCH8能够抑制H1N1A/PR8/34病毒的复制。通过检测IAV VLPs(viral like particles)病毒蛋白表达发现，MARCH8不影响病毒包膜糖蛋白HA和NA在胞内的表达以及VLPs中的掺入;而是，特异性的下调包膜蛋白M2的表达。MARCH8过表达和沉默实验均证明，MARCH8下调IAV感染后M2蛋白的表达和在质膜上的分布。 进一步研究其机制发现，MARCH8下调M2依赖其E3酶活性。MARCH8介导M2泛素化，连接K63型多泛素链，并通过溶酶体降解。免疫荧光实验发现MARCH8和M2在胞内共定位于早期内体和晚期内体中。通过对M2蛋白胞内区多个赖氨酸位点逐一突变，发现其78位的赖氨酸(K78)，是泛素化发生的主要位点，同时是MARCH8降解M2所必需的。利用反向遗传学方法，构建的携带M2K78R突变的A/PR8/34病毒，能够逃逸MARCH8对M2的抑制作用。 同时，进一步研究MARCH8对不同IAV病毒株的抑制作用，发现MARCH8对H1N1A/WSN/33病毒复制的抑制效果不明显，进一步检测发现，MARCH8不下调A/WSN/33病毒感染后胞内M2表达;而且，A/WSN/33感染下调MARCH8表达。分别过表达A/WSN/33的不同病毒蛋白发现，A/WSN/33的NS1蛋白能够下调MARCH8表达，并拮抗MARCH8调控M2的作用，而A/PR8/34的NS1蛋白没有此功能。通过比对两种病毒的NS1蛋白氨基酸序列，发现共七个差异位点，通过氨基酸替换发现A/WSN/33NS1下调MARCH8依赖于其结合CPSF30的能力。 综上所述，本论文首次发现MARCH8能够抑制A/PR8/34复制，并证明MARCH8靶向包膜蛋白M2，通过E3泛素连接酶活性介导M2降解，M2胞内区的K78位点是MARCH8介导其降解的一个必要条件。同时，发现A/WSN/33已经进化出一种拮抗MARCH8的功能，该病毒利用NS1拮抗MARCH8调控M2的作用，而NS1下调MARCH8表达与其结合CPSF30的能力相关。该研究不仅丰富了对于MARCH8生理功能的认识，而且提示其可能是一种重要的宿主抗IAV策略，为进一步研究IAV的致病机理和跨种传播机制提供了新的靶点。