人源肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起发展中国家婴幼儿和旅游者腹泻的主要致病原。定居因子和肠毒素是ETEC腹泻的主要致病因子和保护性抗原。定居因子血清型复杂、分布多样，其中CFA／I、CS3和CS6分和最广。肠毒素分为不耐热肠毒素(heat-labile toxin，LT)和耐热肠毒素(heat-stabletoxin，ST)。LT由A、B两个亚基组成，B亚基为无毒性抗原。ST为一小肽毒性蛋白，没有免疫原性。本研究首先将优势血清型定居因子抗原CFA/I和CS6基因，构建在同一质粒上，依赖asd基因的宿主一载体平衡致死系统，在减毒痢疾杆菌疫苗株中稳定表达。动物实验显示该菌株采用CFA或LB培养、不同免疫剂量对最终产生的抗体反应，均达到了与单独表达CFA／I和CS6菌株分别免疫和共同免疫相一致的免疫效果。同时ETEC抗原的表达不影响载体菌自身生长与免疫原性。以同样的方法将优势血清型定居因子抗原CS3和融合肠毒素LTB／STm(LT的B亚基与无毒的突变ST融合)基因构建在减毒痢疾杆菌疫苗株中稳定表达。结果表明在启动子trc的作用下CS3达到了高效表达，在双启动子ompC和trc的作用下融合肠毒素的表达受渗透压调节，细胞的生长更稳定快速，免疫效果良好。混合上述两种疫苗菌株构建ETEC多价活疫苗，免疫结果显示该混合疫苗与各疫苗株的免疫原性无显著差异，均能够诱导机体产生针对ETEC定居因子CFA／I、CS3和CS6，肠毒素LTB、ST及载体菌自身的特异性血清和黏膜抗体反应，可望能成为比较理想的预防由ETEc和志贺氏福氏2a痢疾杆菌引起的腹泻的多价疫苗株。