猪血血红素的提取纯化及微胶囊补铁剂的制备

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猪血血红蛋白中含有丰富的血红素,血红素是一种重要的铁卟啉配合物,在生物体内具有多种生理活性。研究表明,血红素铁是一种新型的生物态铁,无毒副作用,可以直接被肠粘膜细胞吸收,不产生消化道刺激,生物利用率高,是理想的补铁制剂。所以,本研究以新鲜猪血为原料通过超声波辅助酶法制备血红素粗品,然后经过盐析、凝胶层析等纯化方法,将制得的血红素粗品进一步纯化,最后将得到的血红素进行微胶囊包裹,制备新型的微胶囊补铁制剂。主要研究内容有:1.以新鲜猪血为原料,研究了超声波破碎功率、超声波破碎时间和红细胞浓度对红细胞破碎的影响,并采用正交组合方法进行优化,确定最佳超声波破碎条件为:红细胞与加入水的比例为5:1,超声破破碎功率为185W,破碎时间为9min。随后利用碱性蛋白酶酶解技术对新鲜猪血进行血红素提取。采用响应面分析法对酶解温度、时间、pH、酶与底物浓度比等因素进行了优化。试验结果显示酶解最佳条件为:酶解温度59.3℃、时间125.0min、pH8.6、酶与底物浓度比4680.0U·g -1,血红素的得率为72%、提取粗品纯度为33.8%。2.通过对血红素粗品分离纯化工艺的研究。实验确定了最佳工艺参数:流速为4mL·min-1,填料高度为30cm,进样浓度为4mg·mL-1,采用Sephadex G-10凝胶分离纯化血红素,选用高效液相色谱对纯化的血红素进行鉴定。最终血红素的含量可以达到93%,纯度可以达到90%,远远高出市场上所销售的血红素商品中血红素含量,分离纯化效果比较理想。3.为了掩盖血红素的不良气味,提高其稳定性,分别以卡拉胶、黄原胶、阿拉伯胶、明胶等为壁材,以提取后的血红素为芯材,采用冷冻干燥工艺,结合粉碎和筛分,制备微胶囊补铁制剂,研究了壁材/芯材比、预冻时间和壁材浓度对血红素微胶囊的包埋率影响。结果表明:以卡拉胶为壁材时,血红素的包埋率最高,是较适宜的壁材。通过响应面法分析最佳工艺条件为:壁材:芯材为19.5:1、壁材浓度为9.8%和预冻时间13.0h,血红素微胶囊的包埋率达到92.2%。
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