转移是肿瘤生物学行为的本质特征,也是肿瘤病人死亡的主要原因,因此研究肿瘤转移是防治肿瘤的一项重要任务。传统中医理论将恶性肿瘤的发病机理总结为三点：气滞血瘀、痰结湿聚和气血亏虚。也有大量基础实验和临床研究表明,几乎所有肿瘤患者均存在高凝状态。肿瘤患者的血液处于浓、黏、聚、凝的“高凝状态”,被证实为肿瘤血瘀证,并贯穿于肿瘤的发生、增殖、浸润和转移不同的病理阶段。肿瘤的恶性程度愈高,病期愈晚者,其高凝现象则愈明显。因此,根据“有是证用是药”的治疗原则,活血药一直广泛应用于肿瘤的治疗当中。然而近代一些临床及基础实验的研究发现,某些活血药可能有促进肿瘤转移的作用,但也有一部分研究称活血药可以抑制肿瘤的增殖及转移,那么活血药在肿瘤治疗过程中究竟是起什么作用?其作用机制是什么?由于活血药种类繁多、配伍药物不同等因素,很难得出客观准确的结论。导师既往的研究结果提示活血药对肿瘤细胞的侵袭转移可能因条件的不同而既可能表现为抑制作用,又可能表现为促进作用,其作用机制的复杂性可见一斑,有待于进一步深入探讨。本课题是在导师前期工作的基础上依托国家自然科学基金展开的。在前期工作的基础上,我们选择了苏木和川芎,制备大鼠含药血清,干预PG细胞,发现苏木和川芎的含药血清对PG细胞的增殖有促进作用。综合考虑各种因素,我们选择活血药单体丹参酮ⅡA作为干预药物,体外实验分为常氧和低氧两种状态,采用流式细胞术、免疫组化等技术检测了CD44s、CD44v6、HIF-1α、CD29、CD324等相关指标,重建基底膜侵袭、肿瘤细胞与基底膜成分的黏附能力测定等实验,从不同角度说明丹参酮ⅡA对PG细胞增殖及粘附能力的影响。主要研究结论：1：苏木、川芎含药血清对PG细胞增殖的影响：常氧和低氧之间存在着差异(p<0.05),含药血清之间也存在着差异(p=0.016<0.05)。苏木、川芎含药血清有促进PG细胞增殖作用(苏木、川芎含药血清浓度为20%的时候促进PG细胞增殖的作用最大)；24h、48h时低氧环境有利于含药血清促进PG细胞的增殖,72h的时候常氧环境有利于苏木、川芎含药血清有促进PG细胞增殖作用；随着苏木、川芎含药血清作用时间的延长,越有利于促进PG细胞的增殖(72h的时候苏木、川芎含药血清促进PG细胞的增殖的作用最大)。2：丹参酮ⅡA对PG细胞增殖的影响：常氧和低氧之间存在着差异(p<0.05),丹参酮ⅡA各浓度之间也存在着差异(p<0.05)。丹参酮ⅡA有促进PG细胞增殖作用；随着丹参酮ⅡA作用时间的延长,越有利于促进PG细胞的增殖(72h的时候其促进PG细胞的增殖的作用最大)。并且低氧环境更有利于丹参酮ⅡA对PG细胞增殖的影响。3：流式细胞术检测CD29及CD324表达：CD29：丹参酮ⅡA分别能在常氧和低氧的环境下随着其浓度的升高,降低CD29的表达,从而抑制其转移,丹参酮ⅡA浓度为24μg/ml时效果最明显,这与现在多项体外实验研究证明丹参酮ⅡA能抑制肿瘤转移相符。CD324：适度的缺氧能提高CD324的表达,从而可直接明显的增加肿瘤细胞增殖,并有利于细胞的侵袭。在常氧环境下随着丹参酮ⅡA药物浓度的增加其表达值也在增加,表明PG细胞的浸润转移能力随着丹参酮ⅡA药物浓度的增加在减弱,在丹参酮ⅡA药物浓度为24μg/ml时PG细胞的浸润转移能力减到最低；然而在低氧环境中随着丹参酮ⅡA药物浓度的增加其表达值在减少,表明PG细胞的浸润转移能力随着丹参酮ⅡA药物浓度的增加也在增加,在丹参酮ⅡA药物浓度为24μg/ml时PG细胞的浸润转移能力增加到最大。4：免疫组化检测CD44s、CD44v6、HIF-1α的表达：PG细胞CD44s表达在常氧环境下明显高于低氧环境,然而丹参酮ⅡA各浓度之间对PG细胞CD44s表达没有差别。说明在常氧环境下可能更能抑制PG细胞的迁移能力,从而抑制其转移。然而从统计学分析氧浓度、丹参酮ⅡA对CD44v6表达没有差异；常氧环境下HIF-la表达量比乏氧环境下要高,说明在乏氧环境能抑制细胞的增殖。丹参酮ⅡA对HIF-la表达没有调节作用。5：重建基底膜侵袭实验及肿瘤细胞与基底膜成分的黏附能力测定：不同氧环境下丹参酮ⅡA各药物浓度对PG细胞侵袭力的影响,结果显示：在低氧环境下,PG细胞的侵袭力增强,低氧有助于PG细胞的远处转移。然而丹参酮Ⅱ1A各浓度药物对PG细胞的侵袭力没有明显作用。氧浓度及丹参酮1A对PG细胞的粘附在统计学上没有统计学差异。