单宁酸对溶菌酶纤维化的影响研究

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蛋白纤维化是一种独特的蛋白聚集行为。在人体中发生的蛋白纤维化过程被广泛地认为与许多影响人类健康的重大疾病密切有关,如阿尔茨海默氏症、疯牛病、帕金森症和亨廷顿病,以及Ⅱ型糖尿病等。尽管科学家们对这类疾病进行了大量的研究,但目前人们对于这类疾病仍缺少有效治疗手法以及特效药物。鉴于蛋白纤维化与这类疾病的密切相关性,探寻对蛋白纤维化有抑制作用的有机分子并研究相关抑制机制无疑对蛋白纤维化疾病的治疗、预防、和药物设计具有十分重要的意义。本文研究了单宁酸对溶菌酶纤维化的影响。利用ThT荧光光谱法、傅里叶变换红外光谱法(FTIR)、和原子力显微镜(AFM)技术系统地研究了单宁酸对溶菌酶蛋白纤维化动力学,蛋白纤维二级结构,以及纤维形貌的影响。我们还通过荧光猝灭法和同步荧光法对单宁酸和溶菌酶分子间相互作用的机理进行了研究。对不同温度下取得的荧光猝灭实验结果的差异进行了探讨,并指出了在以往类似研究中他人实验设计上的一个严重缺陷。我们具体的实验结果如下:结果表明,低浓度单宁酸对纤维化有抑制作用,较高浓度单宁酸会促使生成一种非纤维聚集体。单宁酸对溶菌酶的猝灭形式是静态猝灭,其生成的复合物中,二者比例近似为1:1,并且存在非辐射能量转移。单宁酸作用于溶菌酶时,酪氨酸残基几乎不参与体系的反应,但两者结合时会提高色氨酸残基周围微环境极性,并降低疏水性。在纤维孵化温度下,即323~333K范围内,溶菌酶与单宁酸的结合以疏水作用力为主,二者之间的疏水作用会减弱蛋白质分子间作用力,达到抑制溶菌酶分子自组装的作用,同时破坏富含β-sheet自组装结构,以至于不能形成纤维聚集体。单宁酸和溶菌酶相互作用的荧光猝灭实验的结果和温度密切相关。在非纤维孵化温度下,即298~308K范围内,溶菌酶与单宁酸的结合以氢键和范德华力为主,与高温下得到的实验结论完全不同。本研究对于深入了解一些有机分子对于纤维化的影响提供新的实验方法和思路。为全面理解类似结构有机分子对蛋白质纤维化影响提供了新的证据。
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