论文部分内容阅读
研究背景与目的：铂类药物是迄今为止应用最广泛的抗肿瘤药物之一。基于顺铂,奈达铂,奥沙利铂在头颈部肿瘤治疗中的广泛应用及良好疗效,治疗中带来的毒副作用也成为选择用药的主要考虑因素。铂类药物的主要共同毒性为：肝毒性,肾毒性,血液毒性,耳毒性等(各药毒性又侧重不同)。近来关于铂类药物的肾毒性已有一定防护措施,但对于耳毒性的防治手段则相对落后,原因之一就在于对铂类药物耳毒性的发生机理不十分明了,关于铂类药物耳毒性机制及耳毒性大小方面的研究也甚少。因此深入探讨铂类药物耳毒性机制可为其耳毒性的防护提供新思路,且可就在耳毒性方面,为顺铂,奈达铂及奥沙利铂的临床选择应用提供依据。我们参考顺铂引起细胞凋亡致耳毒性机制的研究方法,就奈达铂、奥沙利铂致豚鼠螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3活化进行研究及对比,旨在对顺铂、奈达铂、奥沙利铂耳毒性机制进行探讨,对其耳毒性大小进行对比。方法：首先取30只正常白化青年豚鼠摸索出建立活体耳毒性模型适宜剂量,尔后取48只听力正常的白化青年豚鼠,随机分为对照组、顺铂组、奈达铂组、奥沙利铂组；分组注射前述摸索出的摩尔量三种铂类化疗药,对照组注射生理盐水,用TUNEL法检测各组凋亡细胞数量变化,用免疫组化法检测各组螺旋神经节细胞中caspase-3的表达。TUNEL切片观察凋亡指数(AI),Caspase-3切片观察免疫组化阳性指数(AIOD=阳性面积比×OD值)。组内及组间数据用Microsoft Excel2000软件包进行单因素方差分析；结果均采用均数±标准差(x±s)表示,分别以P<0.05和P<0.01作为显著性判断标准。结果：1.建立活体耳毒性模型适宜等摩尔量顺铂、奈达铂、奥沙利铂剂量分别为12.5mg/kg,12.6mg/kg,16.6mg/kg。2.以此剂量建立耳毒性模型后取耳蜗组织切片进行凋亡检测及caspase-3免疫组化染色后分析数据得出1)顺铂组螺旋神经节细胞凋亡与以往类似实验研究结果符合。2)等摩尔量奈达铂组豚鼠耳蜗中螺旋神经节细胞TUNEL染色细胞数明显增加,此时检测螺旋神经节细胞中caspase-3免疫组化染色出现阳性结果,说明SGC凋亡中有caspase-3的激活,与对照组比较有统计学意义。3)奥沙利铂组螺旋神经节细胞TUNEI染色细胞数稍有增加,此时检测螺旋神经节细胞中caspase-3免疫组化染色阳性不明显,较对照组无统计学意义。4)顺铂组与奈达铂组相比无明显统计学意义。结论：在对照组和实验组中caspase-3的表达状况与TUNEL染色阳性细胞的出现基本相符。顺铂组及奈达铂组较对照组凋亡及caspase-3β日性表达较对照组比较具有明显差异,提示caspase-3介导的信号传导机制可能参与了CDDP、NEDP所致的耳蜗细胞凋亡过程,并导致耳毒性的发生,此实验结果可为临床上实现对CDDP、NEDP耳毒性的有效防护提供理论基础。但两组间未见明显统计学差异,未能证明顺铂耳毒性高于奈达铂。奥沙利铂组未见细胞明显凋亡,因其1)内耳毒性较小,2)在内耳中代谢动力学与顺铂有很大差异(5mg/kg顺铂的AUC曲线与16.6mg/kg奥沙利铂的AUC曲线相似),3)活体动物内耳毒性模型建立存在较大难度(在产生内耳毒性前已因其它全身副作用致死)。其内耳毒性机制有待进一步研究,建议以后研究方向可考虑活体外细胞水平建立模型以便研究[15]。