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对乳杆菌分类鉴定及其多样性研究是开发利用乳杆菌的基础。本课题在建立了对乳杆菌进行分类的ERIC-PCR和AFLP的试验体系的基础上,首次对来自西藏、新疆及云南不同地区少数民族传统发酵乳制品中的共265株乳杆菌采用ERIC-PCR和AFLP技术进行了遗传多样性的研究。为全面系统地了解我国少数民族地区的发酵制品中的乳杆菌的多样性提供了参考,也为进一步开发和利用传统发酵乳制品中的乳酸菌资源奠定了基础。主要研究结论如下:1.确立了适用于乳杆菌的ERIC-PCR和AFLP两种分子标记的具体实验方法:优化了ERIC-PCR扩增体系,确定采用25μL体系中加入MgCl(225mM)1.0μL,引物(10pmol/μL)2.0μL对模板进行ERIC-PCR扩增,扩增产物经1.8%琼脂糖凝胶电泳得到ERIC-PCR指纹图谱。图谱条带清晰,便于认读。采用64对选择性扩增引物对6株乳杆菌的标准菌进行AFLP扩增,从中筛选出2对条带清晰、带型好且多态性丰富的引物组合,即引物组合E+GT/M+T和引物组合E+G/M+TA,做为下一步实验中选择性扩增引物,对来自不同地区的乳杆菌进行多态性分析。2.对分离自西藏不同地区的115株乳杆菌进行多样性研究。采用ERIC-PCR的分子标记方法,以0.8为分界点,菌被分为14个群。该方法可以分辨分离自西藏不同地区的干酪乳杆菌、发酵乳杆菌和植物乳杆菌,无法彻底分辨干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌。采用AFLP的分子标记方法,以0.85为分界点,菌被分成4个AFLP群,该分子标记方法可以分辨分离自西藏不同地区的干酪乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌和植物乳杆菌。同时采用上述两种方法对西藏地区的优势菌种L.casei和L.fermentum进行分型。不同方法分型结果不同,但都无法在种内按来源或分离基物的不同分辨出这些乳杆菌。3.对分离自新疆不同地区的81株乳杆菌进行多样性研究。采用ERIC-PCR的分子标记方法,以0.76为分界点,所有菌被分为4个群。采用AFLP的分子标记方法,以0.805为分界点,菌被分为6个群。两种分子标记方法都可以分辨出分离自新疆不同地区的干酪乳杆菌和瑞士乳杆菌。同时采用两种方法对新疆地区的L.helveticus进行种内分型,不同方法分型结果不同,但都无法按来源将分离自新疆不同地区的乳杆菌分辨出来。4.对分离自云南不同地区的69株乳杆菌进行多样性研究。采用ERIC-PCR的分子标记方法,以0.8为分界点,所有菌被分为4个群。该方法可以分辨云南不同地区的发酵乳杆菌、高加索乳杆菌、瑞士乳杆菌和植物乳杆菌,无法分辨瑞士乳杆菌和三得利乳杆菌。采用AFLP的分子标记方法,以0.89为分界点,所有菌被分成5个AFLP群。该分子标记方法在一定的相似性水平上得以区分发酵乳杆菌、高加索乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌和三得利乳杆菌。同时采用两种方法对云南地区的L.helveticus种内分型。不同方法分型结果不同,但两种标记都无法将分离自云南不同地区的乳杆菌按来源得以分辨。5.采用ERIC-PCR对来自西藏、新疆和云南三个地区的105株瑞士乳杆菌进行多样性分析。以0.8为分界点,三地区的乳杆菌被分成7个群。该方法可以将西藏地区的瑞士乳杆菌聚为一类,而新疆和云南地区的乳杆菌之间存在交叉,无法完全分辨开。采用AFLP进行多样性分析,以0.8为分界点,三地区的乳杆菌被分成5个群。该方法可以按照其地理来源分辨来自三个地区的乳杆菌。