志贺菌是人类感染性腹泻的主要病原体之一,也可感染人以外的灵长类动物。以往人们认为志贺菌不感染畜禽,事实上,国内外大量的资料表明志贺菌可感染猪、牛、兔、鸭、鸡等畜禽,并可引起它们发病甚至死亡。鸡志贺菌病是近些年发现的急性传染病。该病流行广泛,危害严重,可引起不同品种、不同日龄的鸡发生腹泻,并可导致雏鸡死亡,给我国养禽业造成了巨大的经济损失。义因志贺菌可能在人禽间造成交互感染,这就给人类公共卫生安全造成了严重隐患。因此,对鸡志贺菌病展开研究不但具有重要的兽医卫生学意义,而且具有重大的医学公共卫生学意义。本研究以采集的腹泻鸡病料为材料进行志贺菌的分离,之后克隆、分析鸡源志贺菌IpaC基因,最后原核表达IpaC蛋白并制备该蛋白的多克隆抗体。具体研究结果如下：1.通过分离培养、抹片镜检、生化试验、PCR试验及动物试验对腹泻鸡病料进行志贺菌的分离鉴定。结果显示：从驻马店腹泻鸡心血中分离出1株志贺菌；该菌致病性较强,攻毒组雏鸡发病率为100%(10/10)、病死率为50%(5/10),临床表现为病鸡拉血便,重者脓血痢；病(死)鸡剖检可见肠壁变薄、有出血斑,肝脏肿大出血,肺出血、淤血,脾脏出血,肾肿大；镜检可见肠道、肝脏、脾脏、肺脏有明显病变,具体表现为肠粘膜上皮细胞坏死脱落,肠绒毛结构崩解,固有层出血,肠腺萎缩,肝脏中央静脉及窦状隙扩张淤血,脾窦淤血.,肺泡、支气管、呼吸性支气管淤血。2.根据GenBank上发表的人源志贺菌IpaC基因ORF两端的保守区设计一对引物,用PCR方法从ZMD-01株鸡源志贺菌毒力质粒上扩增出IpaC基因片段并成功克隆到pMD18-T载体后进行测序。测序结果表明：与人源志贺菌相比,发现仅存在2个碱基突变,757位T变为C,936位G变为A,757位的突变使精氨酸变为甘氨酸,对蛋白的表达没有太大的影响；志贺菌不同分离株的IpaC基因的同源性很高,核苷酸序列同源性在97.3%-99.9%之间,其推导的氨基酸序列的同源性在96.2%-99.7%之间,其中,鸡源志贺菌IpaC基因与日本株福氏志贺菌X15319的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性最高,同源性分别为99.8%、99.7%,与美国株鲍氏志贺菌CP001062的核苷酸序列的同源性最低,为97.3%,与美国株鲍氏志贺菌CP001062和澳大利亚株痢疾志贺菌AY206439IpaC基因推导的氨基酸序列的同源性最低,为96.4%；分离株ZMD-01株鸡源志贺菌与参考株AL391753相似性较大,它们在同一个分支上。3.将ZMD-01株志贺菌IpaC基因克隆至载体pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET32a(+)-IpaC。然后将重组表达质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG作为诱导剂进行诱导表达,SDS-PAGE试验结果表明成功表达IpaC重组蛋白。该重组蛋白分子量约为63kDa,经薄层凝胶光密度扫描分析,目的蛋白古菌体总蛋白的21%。对诱导前菌液培养时间、IPTG浓度、诱导时间这三个条件进行优化,最终确定最佳培养条件：将含重组表达质粒pET32a-IpaC的BL21(DE3)菌液培养3h(OD值约为0.6)加入终浓度为1.0mM的IPTG,诱导4h时目的蛋白的量最大。大量表达目的蛋白后裂解细菌,分别取上清液和沉淀进行SDS-PAGE,结果显示目的蛋白既存在于上清中,也存在包涵体中。上清液直接经Ni-AgaroseHis标签纯化试剂盒纯化后纯度可达90%以上。Western Blot分析显示,重组蛋白与ZMD-01株阳性血清发生特异性反应。纯化的重组蛋白免疫公鸡,血清最高效价可达1：12800,说明该蛋白具有良好的免疫原性。