应用小鼠胚胎成纤维细胞培养检测镉、甲醛的细胞毒性

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目的 在本实验室建立小鼠胚胎成纤维细胞培养方法,并在此基础上用培养的细胞检测氯化镉、甲醛等外来化合物的细胞毒性反应。 方法 在无菌条件下从怀孕小鼠取得胎龄12~16日的胎鼠,用0.25%胰蛋白酶消化法和组织块培养法进行小鼠胚胎成纤维细胞培养,对原代培养细胞进行传代培养和成纤维细胞的纯化,并应用培养的成纤维细胞检测不同浓度的氯化镉、甲醛对细胞存活情况(MTT比色法)和遗传毒性(微核实验)的影响。 结果 成功进行了小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和传代培养,确定了适当的培养传代方法;绘制了细胞生长曲线;用第三代细胞测定氯化镉、甲醛的24小时半数抑制浓度(IC50)分别为20.51μmol/L和4.54μg/L,剂量对数与概率单位之间的直线回归方程分别为(?)=7.823-2.209X和(?)=7.563-0.978X,直线相关系数r分别为-0.972、-0.994。氯化镉、甲醛24小时染毒的微核实验结果显示,氯化镉和甲醛均能在不使细胞存活率下降时即可导致微核细胞率增高。 结论 0.25%胰蛋白酶消化法和组织块培养法均可用于小鼠胚胎成纤维细胞培养,前者效果较好;应用0.125%胰蛋白酶消化传代细胞比用0.05%胰蛋白酶/0.02%EDTA混合液更方便和易于掌握,细胞在传至第三代时基本纯化,生长状况较好:小鼠胚胎成纤维细胞体外暴露于氯化镉、甲醛造成存活率下降和遗传损伤:实验具有一定的稳定性和可重复性,用于外来化合物体外毒性检测具有一定的应用价值。
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