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杆状病毒表达系统(Baculovirus expression system，BVES)是一种利用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行外源蛋白生产的真核表达系统，具有易于体外培养、翻译后修饰、外源基因容量大、蛋白表达能力强、表达蛋白具有良好的生物活性、生物安全性好等优势，但也存在特异性蛋白表达障碍、基因组不稳定、自身酶系统影响重组蛋白产量等问题。目前已经开发出多种BVES，其中应用最为广泛的是Bac-to-Bac杆状病毒表达系统。本研究利用顺式作用元件改造pFastBacDual供体质粒，存载体水甲优化提升BVES外源蛋白表达量，旨在筛选出适用范围广、提升能力强的顺式作用元件和元件组合，为在BVES中更低成本生产重组蛋白提供参考。
在第二章中利用Hr1、Hr3杆状病毒同源增强子、WPRE转录后调控元件、CAG、SV40启动子等顺式作用元件及元件组合对pFastBacDual供体质粒进行改造，成功获得11种不同改造类型的pFastBacDual供体质粒，为下一步研究不同调控元件对BVES重组蛋白生产的影响，获得适用性广泛、提升效果显著的改造类型打下基础。
第三章将改造的pFastBacDual供体质粒，利用Bac-to-Bac系统表达RHDV衣壳蛋白VP60，获得的重组蛋白均具有良好的生物活性，Hr1、Hr3、SV40、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40-WPRE、SV40-WPRE-Melt这7种改造类型均能够提高VP60蛋白HA效价，其中Hr3、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合的提升效果更为显著，达到8～16倍。初步筛选出了对RHDV重组VP60蛋白生产具有提升作用的载体类型:Hr1、Hr3、SV40、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40-WPRE，为RHDV亚单位疫苗及诊断试剂开发提供借鉴。
第四章将RHDV VP60蛋白表达筛选出的优势改造类犁应用于CPV衣壳蛋白VP2重组蛋门的表达，结果表明筛选的优势改造类型对VP2蛋白表达均具有提升作用，其中Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合提升作用更为显著。为CPV亚单位疫苗在BVES中更低成本生产提供参考。
综上试验:不同改造类型的供体质粒对VP60、VP2重组蛋白的作用效果表明:Hr1、Hr1-WPRE、Hr3、Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合对不同类型重组蛋白生产均具有提升作用，具有较好的适用性，其中Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合对BVES生产重组蛋白提升效果更为显著。筛选出的改造类型具有适应性强、提升效果明显等优势，为重组蛋白在BVES的低成本生产提供参考。
在第二章中利用Hr1、Hr3杆状病毒同源增强子、WPRE转录后调控元件、CAG、SV40启动子等顺式作用元件及元件组合对pFastBacDual供体质粒进行改造，成功获得11种不同改造类型的pFastBacDual供体质粒，为下一步研究不同调控元件对BVES重组蛋白生产的影响，获得适用性广泛、提升效果显著的改造类型打下基础。
第三章将改造的pFastBacDual供体质粒，利用Bac-to-Bac系统表达RHDV衣壳蛋白VP60，获得的重组蛋白均具有良好的生物活性，Hr1、Hr3、SV40、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40-WPRE、SV40-WPRE-Melt这7种改造类型均能够提高VP60蛋白HA效价，其中Hr3、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合的提升效果更为显著，达到8～16倍。初步筛选出了对RHDV重组VP60蛋白生产具有提升作用的载体类型:Hr1、Hr3、SV40、Hr1-WPRE、Hr3-WPRE、SV40-WPRE，为RHDV亚单位疫苗及诊断试剂开发提供借鉴。
第四章将RHDV VP60蛋白表达筛选出的优势改造类犁应用于CPV衣壳蛋白VP2重组蛋门的表达，结果表明筛选的优势改造类型对VP2蛋白表达均具有提升作用，其中Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合提升作用更为显著。为CPV亚单位疫苗在BVES中更低成本生产提供参考。
综上试验:不同改造类型的供体质粒对VP60、VP2重组蛋白的作用效果表明:Hr1、Hr1-WPRE、Hr3、Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合对不同类型重组蛋白生产均具有提升作用，具有较好的适用性，其中Hr3-WPRE、SV40、SV40-WPRE元件及组合对BVES生产重组蛋白提升效果更为显著。筛选出的改造类型具有适应性强、提升效果明显等优势，为重组蛋白在BVES的低成本生产提供参考。