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支气管哮喘(Bronchial asthma,哮喘)是儿童最常见的慢性异质性疾病之一,以气道炎症和气道高反应性为主要特征,其发生发展是多种细胞及细胞组分共同作用的结果。目前,哮喘的发病机制仍不清楚,已有的研究认为T淋巴细胞在哮喘的气道炎症中发挥了关键性的作用。Th22细胞是一种较新发现的独立CD4+T细胞亚群,近来有研究表明,Th22细胞在哮喘的发病过程中发挥着重要作用,Th22细胞的生物学功能是通过其主要的效应因子白介素22(IL-22)来实现的。但目前Th22细胞及IL-22在哮喘中的作用机制尚不清楚。吸入性糖皮质激素(Inhaled corticosteroids,ICS)是控制哮喘的首选方法,广泛应用于临床,取得了良好的临床效果,但仍有部分哮喘患者在应用吸入性糖皮质激素后哮喘症状仍不能得到较好的控制,因此寻找新药物、新治疗靶点仍是哮喘防治工作的重要任务。黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)作为一种具有抗炎、免疫调节、抗纤维化等作用的三萜皂苷类药物,已被证实能有效抑制哮喘小鼠气道炎症。但对于黄芪甲苷是否会影响哮喘发病过程中Th22细胞的分化及IL-22的表达,目前国内外鲜有报道。本课题中我们将研究Th22细胞及其主要效应因子IL-22在哮喘小鼠模型中的作用,观察黄芪甲苷对哮喘小鼠模型Th22细胞及IL-22的影响,探讨黄芪甲苷治疗哮喘的作用机制。32只无特定病原体(SPF)BALB/c雌性小鼠,4周龄,体重约12~15g,以随机数表法分为对照组、哮喘模型组、布地奈德组、黄芪甲苷组4组,每组8只。除正常对照组外,其余各组小鼠均于实验第0,7,14天腹腔注射0.2 mL卵清白蛋白(OVA)和十二水硫酸铝钾混合液(内含OVA100 ug,硫酸铝钾1 mg,PBS溶解)。自第21天起每日上午将除对照组外的3组小鼠放入自制雾化箱内,采用空气压缩泵给小鼠雾化吸入6mL质量分数为5%的OVA溶液,激发哮喘发作,每日1次,每次30 min,连续用12 d。每次激发前1h,布地奈德组小鼠给予雾化吸入布地奈德混悬液,黄芪甲苷组小鼠给予黄芪甲苷-羧甲基纤维素钠混悬液灌胃。对照组用PBS溶液进行腹腔注射致敏及雾化激发,羧甲基纤维素钠(Carboxymethylcellulose sodium,CMC)溶液灌胃。末次激发24 h后,颈椎脱臼法处死小鼠,结扎右肺,取部分右肺组织进行HE、AB-PAS及Masson染色,观察各组小鼠肺内病理学改变情况。灌洗小鼠左肺,留取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),即刻离心(2000 r·min-1,4℃,10 min),回收上清置于-80℃保存备用。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测4组小鼠BALF上清液中IL-22的水平。BALF离心后的沉渣用PBS溶液重悬,姬-瑞氏染液染色后涂片,光镜下分类计数嗜酸性粒细胞及中性粒细胞百分比。取小鼠脾脏制备脾脏单个核细胞悬液,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测小鼠脾脏细胞单细胞悬液中Th22细胞的比例。经OVA致敏及激发哮喘发作后,小鼠出现挠耳抓鼻、打喷嚏、弓背直立、腹肌抽搐、烦躁不安等行为学改变,肺组织病理学切片检测可见嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎细胞浸润增多,杯状细胞大量增生,黏液分泌增多等现象,且出现气道平滑肌增厚、上皮下胶原纤维沉积等气道重塑性改变,哮喘组小鼠炎症评分与对照组比较明显增高(P<0.05),BALF中嗜酸性粒细胞百分比与对照组比较明显增高(P<0.05),中性粒细胞百分比与对照组比较明显增高(P<0.05)。哮喘组小鼠BALF中IL-22的水平较对照组增高(P<0.05),脾脏单细胞悬液中Th22细胞的比例较对照组增加(P<0.05)。布地奈德治疗组、黄芪甲苷治疗组气道炎症评分较哮喘组明显下降(P<0.05),布地奈德组、黄芪甲苷组2组之间气道炎症评分无明显差异(P>0.05)。2个治疗组BALF中IL-22水平和脾脏细胞单细胞悬液中Th22细胞比例也较哮喘组降低(P<0.05),2治疗组之间IL-22水平及Th22细胞比例无明显差异(P>0.05)。本课题研究结果提示:Th22细胞分化增加和IL-22表达及分泌水平的增高可导致哮喘气道炎症反应的发生发展,黄芪甲苷可通过抑制Th22细胞过度分化及IL-22的过度表达和分泌,进而抑制哮喘气道炎症反应,对哮喘发挥治疗性作用。