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背景:我国是慢性肝病特别是慢性乙型肝炎高发地区,由慢性肝炎进展造成肝纤维化(Hepatic fibrosis)是慢性乙肝发展到肝硬化、肝癌的必经之路。当前我们临床对肝纤维化的治疗除了病因治疗外,缺乏其他可以阻止其进展或逆转肝纤维化的方法;在肝纤维化的诊断及评估病情及预后方面亦须有更高效灵敏的检测手段。在肝纤维化病程中,持续的慢性炎症刺激星状细胞(Hepatic stellate cells,HSCs)活化,进而分泌大量细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)蛋白,引发ECM的沉积和重塑,导致纤维化的进展;因此,ECM是肝纤维化发生发展过程中最重要的蛋白成分。深入了解纤维化发生发展过程中ECM的具体成分变化将对研发新的诊疗新策略具有重要意义。目的:建立小鼠动态肝纤维化模型,应用转录组学技术对模型肝组织基质组蛋白变化进行初步筛选和比对,发掘肝纤维化发生发展过程中的关键ECM蛋白,寻找肝纤维化诊断的新标志物和治疗的潜在新靶点。方法:1.制备小鼠动态肝纤维化模型:健康的10周龄雄性C57BL/6小鼠24只分为四组,分别为正常组、CCL4 4w组、CCL4 10w组和CCL4 2w AFD组。模型组小鼠腹部皮下注射四氯化碳(CCl4溶于橄榄油,1:1稀释处理)按照1ml/kg,2次/周。在CCL4处理4周(CCL4 4w)、10周(CCL4 10w)、注射四氯化碳10周后停药2周(CCL4 2w AFD)的时间点处死小鼠并采集肝脏标本,部分肝组织以中性缓冲福尔马林固定液固定,石蜡包埋切片,行天狼星红染色鉴定;另取部分肝组织液氮保存,用于m RNA基因芯片筛选。2、对不同纤维化阶段的肝组织标本进行转录组分析,从中筛选出细胞外基质m RNA并进行组间两两比较,比较差异基质组蛋白m RNA并通过生物信息学分析各阶段的关键基质组蛋白蛋白。对肝纤维化相关基质组蛋白的差异基因进行GO分析从而对这些基因的功能进行描述,并通过差异基因的Pathway分析,寻找不同样品的差异基因可能和哪些细胞通路的改变有关。结果:第一部分:各组肝脏大体外观可见随着CCL4注射时间的延长,肝脏表变逐渐出现颗粒结节并且颜色变灰暗,质地韧、缺乏弹性。天狼星红染色显示正常肝脏除正常肝门区及其它正常血管壁存在胶原染色外,其它部位均无染色;CCL4 4w组肝内胶原沉积主要位于汇管区和汇管间,小叶内已出现明显汇管之间纤维增生,部分已形成桥接纤维化;CCL4 10w组多数已形成桥接纤维,肝小叶已基本被周围桥接纤维完全分割,假小叶形成;CCL4 2w AFD组汇管区之间胶原纤维明显减少,已形成的桥接纤维明显消融。代表不同病理生理阶段的肝纤维化的动态小鼠模型成功构建,可用于进一步的转录组及蛋白质组学分析。第二部分:在基质组范围内筛选各组间差异m RNA,CCL4 4w组与正常组相比,两组间差异表达m RNA共194个,其中上调m RNA有126个,分别是Col1a1、Adam10等;下调m RNA 68个,分别是Loxl4、Lamc2等,其中Col1a1等9个胶原蛋白m RNA在CCL4 4w组显著高表达。CCL4 10w组与CCL4 4w组比较,两组间差异表达基质组蛋白m RNA共56个,其中上调27个,Col1a1、Col1a2及Col6a3等8个胶原蛋白仍显著高表达。MMP14、MMP24等基质金属蛋白酶则下调表达。CCL4 2w AFD组与CCL4 10w组比较,两组间差异表达基质组蛋白m RNA共104个,其中显著下调82个,尤其是Col1a1、Col1a2、Col3a1、Col4a2等11个胶原蛋白的表达显著下降,MMP2等4个基质金属蛋白酶呈下调表达。CCL4 2w AFD组与正常组比较,两组间差异表达基质组蛋白m RNA共123个,其中显著下调56个,上调67个。其中Col1a1等5个胶原蛋白仍呈上调表达,但Col1a2等表达已明显下调。Mmp9等3个MMP仍高表达。结论:在动态肝纤维化模型中筛选大量差异基质组蛋白m RNA,这些m RNA对应的蛋白质可能是肝纤维化发生发展过程中的重要蛋白。