【摘 要】
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阿尔泰金莲花(Trollius altaicus Bunge)为毛茛科金莲花属植物阿尔泰金莲花的干燥花,是新疆阿勒泰地区治疗上呼吸道感染、扁桃体炎等感染炎症性疾病的常用药物,应用历史非常悠久,以荭草素为代表黄酮碳苷类成分是该植物主要的标识性化合物。本课题以总黄酮和荭草素2"-O-β-L半乳糖苷(OGA)提取率为指标,在单因素实验基础上,利用响应面法优化了酶辅助超声法提取阿尔泰金莲花总黄酮和OGA的
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阿尔泰金莲花(Trollius altaicus Bunge)为毛茛科金莲花属植物阿尔泰金莲花的干燥花,是新疆阿勒泰地区治疗上呼吸道感染、扁桃体炎等感染炎症性疾病的常用药物,应用历史非常悠久,以荭草素为代表黄酮碳苷类成分是该植物主要的标识性化合物。本课题以总黄酮和荭草素2"-O-β-L半乳糖苷(OGA)提取率为指标,在单因素实验基础上,利用响应面法优化了酶辅助超声法提取阿尔泰金莲花总黄酮和OGA的最佳提取工艺,并进一步建立了总黄酮的大孔树脂纯化工艺;在此基础上,通过脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW246.7模型对总黄酮提取物(TATFEE)和OGA进行了抗炎活性的研究。主要研究结果简述如下:(1)建立了OGA和荭草苷的HPLC含量测定方法,并测定了几种金莲花中OGA和荭草素的含量。测定结果显示阿尔泰金莲花中OGA含量较高,最高含量可达25.07?0.39 mg/g;来源于河北承德的金莲花中荭草素含量为最高,含量为16.97?0.20 mg/g。(2)采用超声酶辅助提取法对阿尔泰金莲花总黄酮和OGA进行提取工艺的研究,最佳工艺条件为:p H=4,料液比1:40,超声功率90W,酶添加量1.4%,乙醇浓度47.0%,提取时间38 min,提取温度39℃,在此工艺条件下阿尔泰金莲花总黄酮提取率可达17.90?0.33%,与理论值的相对误差为0.26%,OGA提取率可达2.79?0.03%,与理论值的相对误差为0.2%。(3)通过大孔树脂吸附与解吸实验,从D101、AB-8、NKA-9、NKA、H1020、X-5六种树脂中筛选出来的D101树脂对金莲花OGA具有较好富集性能(静态吸附量达12.7mg/g树脂),且易于解吸(解吸率为97.8%)。动态解吸实验结果显示,最大上样量为6.3 mg/g,上样质量浓度为0.2790 mg/m L,上样速率为8BV/h,除杂用水量为8 BV,洗脱剂用量为6 BV,洗脱剂为30%乙醇,洗脱流速为4 BV/h,所得阿尔泰金莲花提取物(TATFEE)中总黄酮含量在58.34?1.30%以上,OGA的含量在21.62?0.47%以上。TATFEE继续经MCI gel CHP 20p色谱纯化分离得到纯度可达95.14%的OGA单体化合物。(4)阿尔泰金莲花总黄酮及其有效成分OGA小于等于125μg/m L的浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用。与LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞的炎症模型组比较,总黄酮有效部位和OGA能显著抑制NO的释放,抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-6的分泌,且呈现出剂量依赖关系。此外,TATFEE和OGA对COX-1和COX-2有明显的抑制作用,其中TATFEE对COX-1、COX-2酶的IC50分别为103.66和6.94μg/m L;OGA对COX-1、COX-2的IC50为122.9和5.01μg/m L。结果说明阿尔泰金莲花总黄酮TATFEE及其有效成分OGA均具有显著的抗炎活性。
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