脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)是造成五岁以下儿童麻痹瘫痪的主要病原微生物,有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个血清型。1955年灭活脊髓灰质炎疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)和 1963 年口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(Oral poliovirus vaccine,OPV)的相继应用以及全球对该病毒的管理与监控,脊灰发病率逐年下降。世界卫生组织(WHO)于1988年发起全球根除脊髓灰质炎行动(GPEI),继2015年9月宣布消灭了脊灰Ⅱ型野生病毒后,于2019年10月24日宣布全球又消灭了脊灰病毒Ⅲ型野生病毒,当前全球仅有Ⅰ型野生毒株在阿富汗和巴基斯坦两个国家流行。此外,由于OPV的使用,疫苗相关麻痹性脊髓灰质炎病例(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)和疫苗衍生病毒(vaccine-derived poliovirus,VDPV)备受关注。目前全球针对脊髓灰质炎病毒的任务是完全根除,针对这一目的,我们不仅要消除现在流行的Ⅰ型野生毒株,还必须消除VAPP、VDPV以及由感染患者排入环境中的长期存活的脊髓灰质炎病毒,VDPV主要是OPV免疫人体后由于机体免疫缺陷或者其他原因减毒株在体内恢复其毒力与传播性变为有致病能力的一种病毒,包括循环型疫苗衍生病毒(circulating vaccine-derived poliovirus,cVDPVs)和免疫缺陷型疫苗衍生病毒(immunodeficiency-associated vaccine-derived poliovirus,iVDPVs)在全球根除脊髓灰质炎病毒这一背景下,灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗终将替代减毒活疫苗。与此同时,脊髓灰质炎病毒根除最后阶段,WHO第三版《世界卫生组织全球行动计划》(GAPⅢ)中指出脊髓灰质炎病毒需在BSL-3实验室进行操作且全球只有少数实验室可以保存脊髓灰质炎病毒减毒株。为满足一般实验室的工作需求,急需可替代真病毒的中和抗体检测新方法。本研究就构建脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株假病毒以检测人群中脊髓灰质炎病毒抗体水平展开。首先以脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株为参考,通过构建表达SabinⅢ型衣壳蛋白P1质粒(pcDNA3.1-P1),将其与含T7RNA聚合酶、P1段被Iuciferase所替代的脊髓灰质炎病毒骨架质粒(酶切体外转录为RNA)共转染293T细胞,包装出只具备一次性感染细胞能力的脊髓灰质炎Ⅲ型Sabin株假病毒代替真病毒作为检测工具。经测定,假病毒颗粒的直径约为30 nm且形态与相应的真病毒相似,可用于评价血清中和抗体效价。同时,本研究对检测脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原ELISA方法进行了改造,将其改良成检测抗脊灰抗体。首先,包被牛抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原IgG,BSA封闭后添加D抗原,然后同时加入兔抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株D抗原IgG和人血清进行竞争性结合,最后加入羊抗兔酶标抗体,改造后的方法可作为以检测血清中和抗体效价的替代方法。该实验确定酶标抗体不与血清发生反应,同时也确定了 ELISA板上所包抗原的最适浓度,酶标抗体稀释度1:1000。通过参考临床血清脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株微量中和试验的结果,找到血清中和效价较高的血清作为该研究的样品,得出R2=0.972的OD值标准曲线。用该方法对来自昆明地区8份血清的中和抗体滴度进行检测,得到血清抗体阳性率与传统微量中和试验法中和抗体阳性率均为75%,两种方法无显著性差异。综上,本实验通过脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株假病毒的构建以及ELISA方法的改进,建立了安全可靠的替代活病毒测定血清中和抗体的新方法。在脊髓灰质炎消灭的最后阶段,对人群中血清抗体的检测和监控人群中抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株保护率,防止该型病毒再次爆发。