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目的：探索在CD44受体分子介导下，寡糖透明质酸（oligosaccharides of hyaluronan,o-HA）对血管内皮细胞功能的影响，以进一步从分子水平了解o-HA对血管内皮细胞的作用机制。
方法：1. 用I型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC），建立人血管内皮细胞原代培养技术。以光镜观察，DiI-Ac-LDL染色，FVIII相关抗原免疫荧光染色和CD31流式检测的方法进行细胞生物学鉴定。2. 免疫荧光法检测HUVEC CD44的表达和分布；建立原代细胞RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术，用电击转染的方法将siRNA导入HUVEC中，利用Real time PCR和Western blot方法分别从mRNA和蛋白水平检测CD44的表达。3. 将o-HA分别作用于siRNA-CD44干扰和阴性siRNA干扰的HUVEC，进行细胞增殖和血管形成实验，观察CD44干扰与未干扰细胞在增殖与血管枝形成现象上的差异，并进一步通过Western blot和PCR方法分别检测信号传导分子Src、FAK、ERK1/2和早期反应基因(early response genes，ERGs)c-JUN、c-FOS的改变，以探讨CD44在介导o-HA促进血管内皮细胞生长中的作用机理。
结果：1. 原代培养细胞10天左右可长成单层，多角形，呈铺路石样排列，DiI染色、FVIII相关抗原免疫荧光染色均呈阳性，细胞表面CD31表达率为98.3％，证实此细胞为内皮细胞。2. 免疫荧光染色证实，体外培养的HUVEC表达CD44，且在细胞表面和胞质内均能被检测到。采用电转导干扰的方法干扰CD44分子，mRNA及蛋白水平干扰率鉴定结果显示，三对siRNA-CD44中有两对干扰率>70％，电击转染72h后蛋白水平干扰效应最佳，干扰率为86.5％±2.0％。3. 10μg/mLo-HA能促进HUVEC增殖和血管枝形成，激活Src、FAK和ERK1/2激酶活性，上调c-JUN、c-FOS基因表达。以上作用均可不同程度被siRNA-CD44干扰所抑制。
结论：1.电击转染是对原代培养HUVEC进行siRNA干扰的一种有效方法。2.HUVEC高表达CD44，分布在HUVEC表面和胞浆内。3.CD44受体分子的作用可能通过激活Src、FAK、ERK信号通路途径而发挥，进一步诱导早期反应基因c-iun、c-FOS上调，从而介导o-HA对HUVEC的增殖和血管形成功能。国内外尚无同类报道。