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生物的生长发育需要对细胞周期进行精确协调的时空调控，而细胞周期蛋白(Cyclin)是细胞周期的推动力。细胞周期蛋白有多种，Cyclin B为其中一种，与催化亚基cdc2组成全酶复合物，即成熟促进因子(MPF)，参与细胞分裂的多个事件的发生和进行。本文采用免疫组化方法和分子生物学技术，在拟穴青蟹的精巢中定位了Cyclin B蛋白，克隆了长毛明对虾和凡纳滨对虾卵巢Cyclin B基因，从而为甲壳类生殖调控机制的研究及水产养殖的发展提供基础资料。主要结果如下：
1.拟穴青蟹精巢Cyclin B蛋白的免疫组化定位。
运用组织学和免疫细胞化学的方法，确定了所选拟穴青蟹精巢的成熟程度，然后对拟穴青蟹精巢中的Cyclin B蛋白进行定位。在所选拟穴青蟹的精巢组织中，Cyclin B蛋白主要分布在精母细胞期，直至精子细胞仍然存在。Cyclin B蛋白在精母细胞中大量表达，在精子细胞少量，出现阳性的精母细胞的染色质有的浓缩成团，反之则成染色质丝，其中浓缩成团的精母细胞的阳性结果更为明显。上述结果表明：在拟穴青蟹精子发生过程中，Cyclin B表达和蛋白定位具有发育阶段依赖性的特征。阴性对照组未出现阳性信号。
2.长毛明对虾和凡纳滨对虾Cyclin B基因的克隆和分析。
运用分子生物学技术，分别研究长毛明对虾和凡纳滨对虾卵巢Cyclin B基因，结果如下：
①分别克隆长毛明对虾和凡纳滨对虾卵巢Cyclin B基因
在NCBI上查找已报道的Cyclin B基因序列，通过对已知物种的CyclinB序列比对，包括埃及伊蚊(Aedes aegypti，GeneBank登录号：XM_001660578)、丽蝇蛹集金小蜂(Nasonia vitripennis，GeneBank登录号：XM_001605776)、日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus，GeneBank登录号：AY769095)、水蚤(Daphniapulex，Joint Genome Institute，JGI)，设计一对简并引物BFP和BRP，扩增出了长毛明对虾和凡纳滨对虾Cyclin B基因的片段。根据己得到序列片段设计引物，利用cDNA末端快速扩增和基因克隆等分子生物学技术，分别克隆出长毛明对虾和凡纳滨对虾Cyclin B基因的全长cDNA序列，推导出其氨基酸序列，并提交给GeneBank。
长毛明对虾Cyclin B基因序列全长为1927bp，含有一个完整的开放阅读框，长1428bp，编码的成熟肽有475个氨基酸组成，分子量的理论值为54763.7Da，等电点为6.19，推测该成熟肽有6个可能的氨基酸磷酸化位点，不具信号肽。分析该蛋白可能定位于细胞核内。
凡纳滨对虾Cyclin B基因序列全长为2326bp，含有一个完整的开放阅读框，长1803bp，编码的成熟肽有600个氨基酸组成，分子量的理论值为69688.0Da，等电点为6.32，推测该成熟肽有9个可能的氨基酸磷酸化位点，不具信号肽。分析该蛋白可能定位于细胞核内。
②长毛明对虾和凡纳滨对虾Cyclin B基因同源性分析。
推测长毛明对虾演绎的Cyclin B蛋白有两个拷贝的氨基酸保守区，分别位于248—333和341—427位氨基酸之间，属于细胞周期蛋白超家族(Cyclin Super—family)，是细胞周期蛋白盒(Cyclin box)的折叠区域。每个拷贝里面都有两个结合位点，第一个结合位点包括9个氨基酸位点，第二个结合位点包括6个氨基酸位点，为与CDK、DNA结合提供识别位点和折叠区域，在细胞周期和翻译过程中起调节作用。长毛明对虾的Cyclin B基因与日本囊对虾(Marsupenaeusjaponicus)的同源性高达93％，而与中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)、帽贝(Patellavulgata)、斑纹蚌(Dreissena polymorpha)、大西洋浪蛤(Spisula solidissima)、水螅(Hydra viridis)分别有71％、61％、60％、59％、57％的同源性。
推测凡纳滨对虾演绎的Cyclin B蛋白有一个拷贝的氨基酸保守区，该氨基酸保守区位于367—458位的氨基酸，属于细胞周期蛋白超家族，氨基酸保守区里包含两个结合位点，第一个结合位点包括2个氨基酸位点，第二个结合位点包括5个氨基酸位点，为与CDK、DNA结合提供识别位点和折叠区域，在细胞周期和翻译过程中起调节作用。凡纳滨对虾的Cyclin B基因与其它特种的Cyclin B具有不同序列一致性。与日本囊对虾的同源性达91％，而与中华绒螯蟹、帽贝、斑纹蚌、大西洋浪蛤、水螅、绿海胆的同源性分别为71％、62％、61％、59％、57％、48％。
③Cyclin B基因系统发育分析。
系统发育分析表明，克隆的长毛明对虾和凡纳滨对虾的Cyclin B基因序列与其它物种的Cyclin B基因归为同一类群，且在近缘物种间有较高的保守性，如日本囊对虾和中华绒螯蟹。