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研究目的通过外源加入不同浓度VEGF-A (vascular endothelial growth factor A)和内源转染VEGF-A质粒两个方面研究VEGF对人肝癌PLC细胞迁移、侵袭及体外形成血管生成拟态(vasculogenic mimicry, VM)能力的影响。方法1.选取人肝癌细胞系PLC,37℃、5%CO2恒温培养箱常规培养。实验分为：正常对照组和加入不同浓度(10μg/L、30μg/L、60μg/L、100μg/L)VEGF-A组;2.利用划痕实验观察加入不同浓度VEGF-A诱导人肝癌PLC细胞后,细胞迁移能力的变化；3.利用Transwell侵袭实验观察加入不同浓度VEGF-A诱导人肝癌PLC细胞后,细胞侵袭能力的变化；4.明胶酶谱实验检测加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9, MMP-9)活性的变化；5.三维培养观察加入不同浓度VEGF-A后各组肝癌细胞体外形成三维管道能力的变化；6. Western blot检测加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin, VE-cadherin)表达的变化；7.逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞VE-cadherin mRNA表达水平的变化；8.瞬时转染VEGF质粒进入人肝癌PLC细胞,Western blot验证转染效果；9.划痕实验观察转染VEGF后人肝癌PLC细胞迁移能力的变化；10.Transwell实验观察转染VEGF后人肝癌PLC细胞侵袭能力的变化；11.明胶酶谱实验观察转染VEGF后人肝癌PLC细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达活性的变化；12.三维培养观察转染VEGF后人肝癌PLC细胞体外形成三维管道能力的变化；13. Western blot检测转染VEGF后人肝癌PLC细胞VE-cadherin表达的变化：14. RT-PCR检测转染VEGF后人肝癌PLC细胞VE-cadherin mRNA表达的变化。结果1.迁移实验结果显示,加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞向划痕中央迁移的距离明显大于正常对照组(P<0.05),并呈剂量依赖性；2. Transwell实验结果显示,加入不同浓度VEGF-A组的PLC细胞穿膜数明显多于正常对照组(P<0.05)；3.明胶酶谱实验结果显示,加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达活性增强(P<0.05),并呈剂量依赖性；4.三维培养结果显示,加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞形成管道能力明显增强,VEGF-A的浓度与管道数量之间呈显著正相关(r=0.929)；5. Western blot和RT-PCR结果显示加入不同浓度VEGF-A后人肝癌PLC细胞的VE-cadherin表达均增强(P<0.05)；6. Western blot验证转染VEGF质粒后的人肝癌PLC细胞VEGF蛋白的表达明显上调(P<0.05)；7.转染VEGF后,肝癌PLC细胞向划痕中央迁移的距离明显大于正常对照组(P<0.05)：8. Transwell结果显示,转染VEGF组的PLC细胞穿膜数明显多于正常对照组(P<0.05);9.转染VEGF质粒后,明胶酶谱实验检测肝癌PLC细胞表达基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性增强(P<0.05)；10.三维培养结果显示转染VEGF后,肝癌PLC细胞能形成明显的三维管道,而未转染组没有管道形成；11. Western blot和RT-PCR结果显示转染VEGF后PLC细胞VE-cadherin的表达明显增强(P<0.05)。结论VEGF能增强人肝癌PLC细胞的迁移、侵袭能力和VM形成能力,VEGF是肝癌VM形成中的重要调控分子,其机制可能是通过上调MMPs和VE-cadherin促进肝癌VM的形成,使肿瘤组织形成多样化的局部微循环,促进肿瘤浸润和转移。本实验为肝癌的抗血管治疗提供了实验依据和作用靶点。