【摘 要】
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目的:剪切应力在血管发育和维持血管稳态中起到重要作用。CX3CR1是趋化因子Fractalkine(FKN,CX3CL1)的唯一受体,可以调节Fractalkine的粘附和趋化特性。本研究目的在于通过加
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目的:剪切应力在血管发育和维持血管稳态中起到重要作用。CX3CR1是趋化因子Fractalkine(FKN,CX3CL1)的唯一受体,可以调节Fractalkine的粘附和趋化特性。本研究目的在于通过加载不同强度和不同时间的剪切应力,观察内皮细胞中CX3CR1的变化情况,从而进一步探讨剪切应力诱导内皮细胞炎症反应的分子基础。方法:1.用M199完全培养基培养EA.hy926细胞株。观察光学显微镜及电子显微镜下细胞形态,采用免疫组化,生长曲线方法鉴定细胞株。2.选择不同强度(0,2.37,4.14,7.11,9.47,14.21,17.76 dyn/cm~2)剪切应力处理细胞2 h。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR),检测细胞中CX3C R1 mRNA表达变化,Western-blotting方法检测细胞中CX3CR1蛋白表达,细胞免疫荧光技术对CX3CR1的蛋白表达进行定位,确定最适表达强度。3.选择不同时间(0,1,2,4,6,8,10 h)处理细胞,从基因和蛋白水平检测细胞中CX3CR1的表达情况,细胞免疫荧光对CX3CR1的蛋白表达进行定位。结果:1.光学显微镜观察细胞呈梭形,细胞株生长2~3 d可铺满单层,漩涡状排列生长,可长成复层,传代后可见管腔样结构。电镜观察横切与纵切的韦伯潘力氏小体(Webel Palade body,WPB)。VIII因子相关抗原免疫组化显示细胞质为棕黄色颗粒。EA.hy926细胞株生长曲线稳定,适用于体外细胞实验。2.不同强度剪切应力处理内皮细胞,CX3CR1基因和蛋白检测均显示在4.14 dyn/cm~2时表达量最高。3.不同时间剪切应力处理内皮细胞,qRT-PCR检测显示,CX3CR1 mRNA在2 h表达最高,Western-blotting检测蛋白水平显示在4h表达最高。结论:不同强度及时间的流体剪切应力可以调节内皮细胞CX3CR1的表达。低剪切应力(4.14 dyn/cm~2)作用显著增强CX3CR1表达。CX3CR1的表达具有时间依赖性。因此,我们推测在低剪切应力诱导动脉硬化生成和发展过程中,CX3CR1起到关键作用。
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