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黄花蒿Artemisia annua L为菊科(Compositae)蒿属(Artemisia)一年生草本植物,为我国传统中药,在现代医学领域,其有效成分青蒿素(Artemisinin)被世界卫生组织称为“世界上唯一有效的抗疟药物”。本文以黄花蒿为材料,研究了青蒿素的提取工艺,并对西南部分地区(四川、贵州、重庆)的野生及部分栽培材料中青蒿素的含量进行了测定。同时,通过生物技术手段,建立黄花蒿的组织培养体系,以期得到青蒿素含量高、生长迅速的细胞系。本研究旨在为缓解青蒿素长期短缺局面提供科学的理论依据。主要研究结果如下:1.采用石油醚超声波辅助提取法,分别考察了5个工艺条件对青蒿素提取率的影响,结果得到,提取时间、超声温度、料液比在一定程度上对青蒿素提取率均具有明显的促进作用,而超声功率对提高青蒿素提取率具有显著的抑制作用,提取次数对提取率的影响最小。进一步选取料液比(X1)、超声温度(X2)和超声功率(X3)为自变量,以青蒿素提取率(Y)为效应变量,采用Box-Behnken Design (BBD)进行试验设计,得青蒿素提取率为0.4234%~0.7353%。通过拟合自变量与效应变量,建立了一个二元回归模型,方差分析的结果证实该回归模型稳定、可信,具有较好的预测效果,可准确反映提取条件与青蒿素提取率之间的关系。通过效应面法(response surface methodology, RSM)优选得到一组响应值最大的优化条件,即料液比为1:42.71,温度为41.86℃,超声功率为120.00W,青蒿素提取率的最大预测值为0.7848%,验证值为0.7826%,预测值与实验值的相对偏差仅为-0.28%。因此,RSM可用来优化青蒿素的超声波提取工艺,且超声辅助提取法具有省时、操作方便等优点,可有效地提高青蒿素的提取率。2.对11份黄花蒿植株中青蒿素含量测定的结果显示,黄花蒿的叶片、茎、花序中均含有青蒿素,但各部位中青蒿素的含量差异明显,花序>叶>茎,其花序中的含量是茎中的12.6~75.6倍,茎中含量最低,大多不超过0.1%。重庆地区4份黄花蒿材料(除重庆黔江材料)的茎、花序、叶中的青蒿素含量均高于四川、贵州的材料,且植株平均含量可达0.731%,特别以重庆酉阳和重庆秀山的野生黄花蒿为代表,青蒿素平均含量高于0.8%。而四川、贵州两省黄花蒿中青蒿素的平均含量低于0.6%,暂未达到工业开发的价值。3.黄花蒿细胞培养的研究证实,黄花蒿茎段在B5培养基上易于诱导出生长旺盛的愈伤组织。以B5基本培养基为基础,采用星点设计(central composite design,CCD)方法优选愈伤细胞继代培养过程中的最优激素组合,效应面分析结果得出:KT浓度为1.59mg/L,NAA浓度为1.83mg/L,6-BA浓度为0.89mg/L,在3种植物激素的协调作用下,黄花蒿的愈伤细胞重量可达259.60g/L,但在该培养基上并未检测到青蒿素的合成。本实验仅在B5基本培养基+KT1.05mg/L+NAA2.50mg/L+6-BA1.60mg/L的培养基组合上检测到青蒿素,证实该培养基对愈伤细胞合成青蒿素具有促进作用,但只能获得103.9μg/g青蒿素,与野生黄花蒿中的青蒿素含量(0.702mg/g)相比,仍处于较低水平。