抑制小麦白粉菌内生真菌的筛选及其活性化合物鉴定

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小麦白粉病(Blumeria graminis f.sp.tritici)是影响我国小麦生产的重要病害之一。在全国各主要麦区都有发生,流行频繁、损失严重。目前,对小麦白粉病的防治主要措施为种植抗性品种和使用杀菌剂。由于白粉病菌生理小种变异较快,抗性品种容易丧失抗性,以及化学药剂长期使用带来的抗药性和环境污染等问题。因此寻找生物药剂防治小麦白粉病备受关注。本研究从健康枸骨茎杆中分离得到内生真菌LPS-1,对小麦白粉病菌的防治效果、菌种鉴定、发酵条件及活性化合物的分离进行初步研究。主要结果如下:(1)采用组织分离法从24科28种健康植物中分离到207株内生真菌,用离体叶段生测方法对发酵液的活性进行测定。结果显示,LPS-1、16-6和SCS-6的防效显著,防效达到90%以上。复筛确定菌株LPS-1为深入研究对象。保护和治疗作用试验结果显示,在施药前后1天接种小麦白粉病菌,LPS-1发酵液对小麦白粉病的保护和治疗作用具有显著的效果,防效都在80%以上。(2)采用松针培养基诱导LPS-1菌株产孢,分生孢子椭圆形或圆形,端部钝圆,无色,孢子大小为25.0~25.4X 14.3~14.5 u 利用ITS序列构建系统发育树,菌株LPS-1序列与Lasiodiplodia pseudotheobromae在同一分支上,且序列相似度为100%。结合形态学与分子生物学综合鉴定,将菌株LPS-1鉴定为Lasiodiplodia pseudotheobromae。(3)通过单因子试验初步探索了菌株LPS-1的发酵条件,明确了较佳的培养基配方及培养条件。LPS-1菌株较佳培养基为:麦精19.95g/L,蔗糖50 g/L,硝酸钠7.5 g/L,七水硫酸镁3.561 g/L,摇瓶发酵较佳条件为:28℃,种龄48h,装液量30mml/100ml三角瓶,接种量3个菌饼,静置发酵6天。(4)用乙醚和乙酸乙酯对LPS-1发酵液浓缩干粉萃取。活性跟踪显示,活性物质主要存在于乙酸乙酯萃取物中,浓度为10mg/L的乙酸乙酯萃取物对小麦白粉病的防效为87.3±2.3%。采用正向硅胶柱层析法、波谱分析和高效制备液相色谱法对抑菌活性化合物分离,得到两个化合物。通过核磁鉴定peak12.15为3-吲哚甲酸,peak12.50为3-吲哚甲醛。
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