产木聚糖酶菌株的筛选、酶的分离纯化及酶学性质的研究

来源 :青海大学   | 被引量 : 8次 | 上传用户:piaoyisuifengpiao001
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对实验室产木聚糖酶的4个属的10株真菌进行筛选,得到一株具有高效木聚糖降解能力的菌株50647。通过ITS序列分析,并结合形态学鉴定确定其属于拟盘多毛孢属。该菌以燕麦秸秆粉和麸皮不溶性木聚糖作为碳源,于25℃条件下,120r/min摇瓶光照培养,第3天发酵液中木聚糖酶活力达到峰值为49.3U/ml,酶的比活力为1066.2U/mg。培养第9天后发酵液中木聚糖酶酶活力为34.3 U/ml,是酶活力峰值的70%左右。SDS-PAGE及酶谱分析表明该菌能够产生6种不同分子量大小的木聚糖酶组分,分别定义为组分A、B、C、D、E、F。其中组分A属于低分子量木聚糖酶,其他木聚糖酶组分均属于高分子量木聚糖酶。
  采用硫酸铵分级沉淀,两步Sephacryl S-100凝胶过滤层析和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法从50647菌株的粗酶液中分离得到一种低分子量木聚糖酶XYL-A。经SDS-PAGE检测达到电泳纯,其相对分子质量为20.6KDa。在整个纯化过程中,XYL-A的纯化倍数为28.1,回收率为2.0。木聚糖酶酶学性质表明,XYL-A的最适反应pH和温度分别为pH5.5和40℃,在pH5-6的范围内具有很好的稳定性,XYL-A的在40℃以下稳定性很好,超过40℃酶活力迅速降低。金属离子Mn2+、Na+、K+对木聚糖酶XYL-A有激活作用,Fe2+在4mM条件下对该酶具有一定的抑制作用,而Hg+则完全抑制木聚糖酶的酶活性。XYL-A具有很强的底物特异性。专一性的作用于木聚糖底物,而对其他一些底物如羧甲基纤维素、纤维素、淀粉、果胶不具有酶活性。以Birchwood木聚糖为底物采用双倒数作图法测得最大反应速率为175.44umol/min·mg,米氏常数为18.14mg/ml。
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