论文部分内容阅读
水稻是三大主要粮食作物之一,对其生长发育相关功能基因的研究具有重要的理论和应用意义。在水稻从营养生长向生殖生长转换过程中涉及了一系列的关键基因。本实验主要以1个早熟粳稻品种石狩白茅为材料,利用抑制缩减杂交文库克隆了多个营养生长到生殖生长转换过程中差异表达的基因。另外,对3个可能与生殖发育相关的基因的功能进行了研究,以期阐明水稻开花的分子机理。实验主要取得了以下研究结果: 1.利用抑制缩减杂交的方法,建立了水稻从营养生长向生殖发育转换过程茎尖组织的上调表达(以生殖转换后RNA为Tester)和下调表达(以营养生长期RNA为Tester)缩减cDNA文库。 2. 经过点杂交和反向Northern杂交验证,以及进一步酶切分析归类,从上调表达文库中共得到16 个差异表达克隆,从下调表达文库中得到17 个差异表达的克隆。 3.对这些差异表达基因克隆的测序结果表明,大多数基因涉及不同的代谢途径,有2 个基因编码转录因子。 4.对这些基因用Northern杂交分析表明,表达量较高能检测到杂交信号的基因有5 个,所占的比例为25%。 其它28 个基因用实时定量PCR 分析,结果表明在营养生长向生殖生长转换过程中有上调或下调表达差异。 5.为研究3 个水稻的生殖发育相关的基因OsEMF2-1, OsEMF2-2, OsFCA 的功能,构建了RNA干涉载体,另外构建了OsEMF2-1 的Ubi启动子超表达载体,转化石狩白茅。 6.用RT-PCR 研究了这3 个基因的表达特性,表明这三个基因都在穗部表达,而在根中没有表达。 7.在分子水平对于转化植株进行鉴定,结果表明转化是成功的,T-DNA插入以单位点插入为主。 8.OsEMF2-1 超表达的转化植株大部分没有Northern杂交信号产生,说明尽管使用强启动子控制其转录,其mRNA的积累被控制在一个低水平。但1 个转化植株产生了2 条长于转基因预期长度的强杂交带。RT-PCR 检测证明这2 条转录本是导入的OsEMF2-1 的转录过程中在Nos 位点发生通读产生的,其高水平积累说明该转录本3’