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先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)是出生缺陷中最常见的疾病，室间隔缺损(ventricular septal defect, VSD)作为先天性心脏病中最主要的类型，对婴幼儿的存活及生活质量产生重要影响。室间隔缺损的发病原因及机理复杂，要想全面了解，除了传统相关的易感基因、环境相关因素外，更需对调控心脏异常分化的蛋白及信号通路进行研究，从而为疾病发生和诊断提供线索。
本研究针对课题组前期应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术联合液相色谱串联基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(LC-MALDI-TOF/TOF MS)方法筛选出一系列室间隔缺损相关的差异蛋白，结合实验结果及文献检索分析，对其中的锌指蛋白41(zinc finger protein 41, ZNF41)和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)进行验证性研究，应用免疫印迹法(Western blot, WB)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)分别检测血清样本中锌指蛋白41和SPARC的表达水平，并应用生物信息学技术对锌指蛋白41和SPARC进行蛋白质结构与功能分析。研究分为两个部分，分别探讨锌指蛋白41和SPARC是否可以作为室间隔缺损的潜在血清标志物，为室间隔缺损的早期诊断及发病机制研究提供参考依据。
第一部分室间隔缺损潜在血清标志物锌指蛋白41的验证研究
目的验证锌指蛋白41是否能作为室间隔缺损的潜在血清标志物，并应用生物信息学进行蛋白结构与功能分析。
方法收集0～10岁的单纯性室间隔缺损、房间隔缺损(atrial septal defect, ASD)、法洛四联症(tetralogy of Fallot, TOF)患者及健康对照者血清样本各20例。应用Westernblot和ELISA检测血清样本中锌指蛋白41的表达水平，应用生物信息学技术对锌指蛋白41的结构功能，参与信号通路等进行分析。
结果1.VSD组、ASD组、TOF组和健康对照组间年龄、性别、民族状况均衡可比(P＞0.05)。
2.Westernblot检测结果显示，锌指蛋白41在4组血清中均有表达，但VSD组中的相对表达水平均高于其他3组(P＜0.05);
3.ELISA检测结果显示，VSD组患者血清中锌指蛋白41浓度为(136.72±56.44)pg/ml，ASD组为(94.54±41.98)pg/ml，TOF组为(100.69±37.08)pg/ml，健康对照组为(82.08±42.46)pg/ml，4组间差异有统计学意义(P＜0.05)，进一步两两比较，VSD组与其他3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)，而其他3组两两间差异均无统计学意义(P＞0.05)。
4.生物信息学分析表明:锌指蛋白41属于C2H2锌指蛋白家族，具有调节与DNA结合的活性，能调控基因表达、蛋白生成，影响细胞分化及器官发育等功能。
结论锌指蛋白41在室间隔缺损患者血清中表达水平较高，可能是室间隔缺损潜在的血清标志物，但仍需后续的大样本临床确认及锌指蛋白41功能的研究。
关键词:室间隔缺损;锌指蛋白41;血清标志物;生物信息学
第二部分室间隔缺损潜在血清标志物SPARC的验证研究
目的验证SPARC作为室间隔缺损潜在血清标志物的可能性并应用生物信息学分析。
方法收集0～10岁的单纯性室间隔缺损、房间隔缺损、法洛四联症患者及健康对照者血清样本各20例。应用Westernblot和ELISA技术检测SPARC在血清样本中的表达水平，运用生物信息学进行SPARC结构功能预测分析。
结果1.4组间年龄、性别、民族均衡可比(P＞0.05)。
2.Westernblot检测结果显示，SPARC在4组血清中均有表达，但在VSD组的相对表达水平均高于其他3组(P＜0.05);
3.ELISA检测结果可知VSD组患者血清中SPARC浓度为(198.03±87.26)pg/ml，ASD组为(137.02±83.89)pg/ml，TOF组为(140.61±79.98)pg/ml，健康对照组为(91.30±55.50)pg/ml，4组间差异有统计学意义(P＜0.05)，进一步两两比较，VSD组与其他的3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)，而其他3组两两间差异均无统计学意义(P＞0.05)。
4.生物信息学结果，SPARC通过其特有的结构域发挥生物学功能，影响细胞增殖和信号转导，参与心脏等器官的发育。
结论SPARC在室间隔缺损的血清中表达水平较高，可能是室间隔缺损的潜在血清标志物，但仍需生物标志物第三阶段的大样本临床确认研究，及SPARC蛋白生物学特性的研究。
本研究针对课题组前期应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术联合液相色谱串联基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(LC-MALDI-TOF/TOF MS)方法筛选出一系列室间隔缺损相关的差异蛋白，结合实验结果及文献检索分析，对其中的锌指蛋白41(zinc finger protein 41, ZNF41)和富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)进行验证性研究，应用免疫印迹法(Western blot, WB)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)分别检测血清样本中锌指蛋白41和SPARC的表达水平，并应用生物信息学技术对锌指蛋白41和SPARC进行蛋白质结构与功能分析。研究分为两个部分，分别探讨锌指蛋白41和SPARC是否可以作为室间隔缺损的潜在血清标志物，为室间隔缺损的早期诊断及发病机制研究提供参考依据。
第一部分室间隔缺损潜在血清标志物锌指蛋白41的验证研究
目的验证锌指蛋白41是否能作为室间隔缺损的潜在血清标志物，并应用生物信息学进行蛋白结构与功能分析。
方法收集0～10岁的单纯性室间隔缺损、房间隔缺损(atrial septal defect, ASD)、法洛四联症(tetralogy of Fallot, TOF)患者及健康对照者血清样本各20例。应用Westernblot和ELISA检测血清样本中锌指蛋白41的表达水平，应用生物信息学技术对锌指蛋白41的结构功能，参与信号通路等进行分析。
结果1.VSD组、ASD组、TOF组和健康对照组间年龄、性别、民族状况均衡可比(P＞0.05)。
2.Westernblot检测结果显示，锌指蛋白41在4组血清中均有表达，但VSD组中的相对表达水平均高于其他3组(P＜0.05);
3.ELISA检测结果显示，VSD组患者血清中锌指蛋白41浓度为(136.72±56.44)pg/ml，ASD组为(94.54±41.98)pg/ml，TOF组为(100.69±37.08)pg/ml，健康对照组为(82.08±42.46)pg/ml，4组间差异有统计学意义(P＜0.05)，进一步两两比较，VSD组与其他3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)，而其他3组两两间差异均无统计学意义(P＞0.05)。
4.生物信息学分析表明:锌指蛋白41属于C2H2锌指蛋白家族，具有调节与DNA结合的活性，能调控基因表达、蛋白生成，影响细胞分化及器官发育等功能。
结论锌指蛋白41在室间隔缺损患者血清中表达水平较高，可能是室间隔缺损潜在的血清标志物，但仍需后续的大样本临床确认及锌指蛋白41功能的研究。
关键词:室间隔缺损;锌指蛋白41;血清标志物;生物信息学
第二部分室间隔缺损潜在血清标志物SPARC的验证研究
目的验证SPARC作为室间隔缺损潜在血清标志物的可能性并应用生物信息学分析。
方法收集0～10岁的单纯性室间隔缺损、房间隔缺损、法洛四联症患者及健康对照者血清样本各20例。应用Westernblot和ELISA技术检测SPARC在血清样本中的表达水平，运用生物信息学进行SPARC结构功能预测分析。
结果1.4组间年龄、性别、民族均衡可比(P＞0.05)。
2.Westernblot检测结果显示，SPARC在4组血清中均有表达，但在VSD组的相对表达水平均高于其他3组(P＜0.05);
3.ELISA检测结果可知VSD组患者血清中SPARC浓度为(198.03±87.26)pg/ml，ASD组为(137.02±83.89)pg/ml，TOF组为(140.61±79.98)pg/ml，健康对照组为(91.30±55.50)pg/ml，4组间差异有统计学意义(P＜0.05)，进一步两两比较，VSD组与其他的3组之间差异均有统计学意义(P＜0.05)，而其他3组两两间差异均无统计学意义(P＞0.05)。
4.生物信息学结果，SPARC通过其特有的结构域发挥生物学功能，影响细胞增殖和信号转导，参与心脏等器官的发育。
结论SPARC在室间隔缺损的血清中表达水平较高，可能是室间隔缺损的潜在血清标志物，但仍需生物标志物第三阶段的大样本临床确认研究，及SPARC蛋白生物学特性的研究。