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褶纹冠蚌(Cristaria plicata)是我国重要的“淡水育珠蚌”之一,开展其分子免疫的研究不仅具有理论意义,而且具有重要的应用价值。本文对褶纹冠蚌超氧化物歧化酶(CpSOD)和溶菌酶(CpLYS)的cDNA进行了克隆,并研究了这两种酶的表达特征。利用RACE-PCR及同源克隆方法,克隆出CpSOD cDNA全长和CpLYS的部分cDNA。CpSOD基因全长891bp,其中编码区468bp,5’端不翻译区83bp,3’端不翻译区340 bp(含ployA尾24 bp)。该基因序列开放阅读框编码155个氨基酸,预测的分子量大小为15.8kDa,等电点为5.80。通过多序列比对结果发现,CpSOD和许多动物的Cu/Zn-SOD相似,均含有保守的4个铜结合位点和4个锌结合位点,信号肽预测未发现信号肽,表明CpSOD是胞质Cu/Zn-SOD。BLAST分析显示CpSOD与其它动物的Cu/Zn-SOD有很高的同源性,利用不同动物的胞质Cu/Zn-SOD氨基酸序列构建系统发育树,结果表明褶纹冠蚌与太平洋牡蛎、栉孔扇贝、紫贻贝共同形成一个小分支。CpLYS的部分cDNA包括530bp,3’端不翻译区259 bp(含ployA尾29bp),共编码89个氨基酸残基。BLAST分析发现CpLYS的部分cDNA序列与其它动物的i-型溶菌酶有较高的同源性,所以推测CpLYS为i-型溶菌酶。利用RT-PCR分析检测CpSOD和CpLYS基因在注射嗜水气单胞菌后的表达情况,结果表明经注射嗜水气单胞菌后,血细胞中CpSOD基因的表达明显增加,到12h后达到最大值,随后表达下降,至48h后恢复至原有水平;而CpLYS基因在注射嗜水气单胞菌后表达量一直增加,至48h后达到最大值,结果说明褶纹冠蚌在受到病原体侵害后,其体内的超氧化物歧化酶和溶菌酶在免疫中均具有防御作用。利用RT-PCR分析检测CpSOD和CpLYS在各组织中的表达情况,结果表明,CpSOD基因在血液、外套膜、鳃、肝胰腺和闭壳肌中均有表达,CpLYS基因在血液、外套膜、鳃、肝胰腺和闭壳肌中也均有表达。