背景:人类组织激肽释放酶(human tissue Kallikreins,hKs)是一组具有不同生理功能的丝氨酸蛋白酶,许多Kallikrein(KLK)基因在不同肿瘤中,特别是激素依赖性肿瘤中有差异表达。其中由KLK3编码的hK3(PSA)是目前公认的最好的前列腺癌标志物。与PSA同属一个家族的激肽释放酶7(Kallikrein 7, KLK7)是新发现的组织激肽释放酶基因家族的成员之一,与KLK3同属一个基因家族,共同位于染色体19q13.3-4 ,并且具有很高的同源性。我们在前期的研究中发现KLK7在有、无间质细胞共培养条件下前列腺增生的上皮细胞中有差异表达。为了进一步研究KLK7基因及其蛋白(hK7)在前列腺增生和前列腺癌组织中的表达和作用,获得该蛋白的抗体成为当前的首要任务。目的:构建KLK7原核表达载体,诱导表达并对表达产物进行分离纯化,制备抗hK7多克隆抗体。并尝试利用该抗体研究hK7在不同前列腺组织(正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌组织)中表达的差异,并探讨其意义。方法:1. PCR技术扩增KLK7基因,将PCR扩增片段和pET-21a载体分别用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,然后用T4 DNA连接酶进行连接,获得pET-21a-KLK7重组表达质粒。2.将pET-21a-KLK7重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),菌落PCR筛选阳性克隆,并提质粒测序证实。3.将测序鉴定阳性的转化菌IPTG诱导表达后,分别用金属鏊合纯化和分子筛纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE检测。4.用纯化的hK7蛋白直接免疫家兔获得抗血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体的效价。5.采用免疫组化二步法,检测组织芯片上的正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌组织中hK7蛋白的表达情况。