Pten作为第一个被发现的具有磷酸酶功能的抑癌基因，是目前肿瘤研究的热点基因之一。本研究工作是在已建立的Pten基因敲除胚胎成纤维细胞系MEF1／Pten-/-和MEF2／Pten-/-及基因芯片法识别PTEN调控的未知基因研究的基础上开展的，目的是对Pten基因敲除胚胎成纤维细胞系的特性进行进一步鉴定及研究一个在Pten基因敲除胚胎成纤维细胞中高表达的新基因pdd87的功能。首先，我们对引进的Pten基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞系MEF1／Pten-/-和MEF2／Pten-/-细胞中PTEN的表达情况及其细胞周期变化进行了研究。试验结果表明PTEN在Pten基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞中不表达，而在正常胚胎成纤维细胞中PTEN是正常表达的，以它们为实验模型进一步研究PTEN的功能是可靠的。Pten基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞系MEF2／Pten-/-与MEF1／Pten-/-相比其S期细胞比例更高。两个细胞系的AKT信号转导通路的变化表明AKT信号转导通路中一些重要的蛋白的磷酸化水平在这两个细胞系中是不同的，此不同可能导致了MEF2／Pten-/-与MEF1／Pten-/-细胞周期的不同。其次，我们对pdd87基因进行了研究。以往的试验发现GenBank登录号为BC005541的小鼠基因在Pten基因敲除后的小鼠脑组织中及小鼠乳腺癌组织中其转录水平上调，Northern杂交证实了此发现。进一步研究发现该基因在Pten缺失的两个小鼠胚胎成纤维细胞系的细胞中也高表达，说明Pten敲除导致该基因高表达是一个比较普遍的现象。Northern杂交结果显示该基因在小鼠的各种组织中均有表达，该基因的转录本大小约3． 7kb，生物信息学分析得知该基因mRNA碱基为3749bp，编码的蛋白质由787个氨基酸组成，该基因位于小鼠的16号染色体上，横跨67Kb,具有23个外显子。该基因编码的蛋白含有一个吡哆醛依赖的脱羧酶功能结构域(a Pyridoxal-dependent decarboxylase domain)，等电点约为6． 0，分子量理论值为87.2kD，暂时称该基因为p‘l’绍7。功能提示可能与谷氨酸脱梭酶相关并参与氨基酸的代谢。 利用PDD87融合荧光蛋白亚细胞定位试验发现该蛋白定位于高尔基体，可能参与高尔基体的部分生理功能。生物信息学分析结果提示PDD87可能与谷氨酸脱梭酶相关并参与氨基酸的代谢，所以我们检测了原核表达的PDD87蛋白的谷氨酸脱按酶活性，试验结果初步表明PDD87蛋白具有催化生成补氨基丁酸的活性。在原核细胞中成功表达了完整的PDD87蛋白并进行了纯化，纯化的蛋白可以进一步进行脱梭酶活性检测。在大肠杆菌中高表达并纯化了含有PDD87C端404个氨基酸的蛋白质，纯化的蛋白可以作为抗原来制备PDD87的抗体。利用表达PDD87的荧光载体pIRESZ一EGFP一PDD87进行的瞬时转染试验发现PDD87的高表达并不明显影响CHO细胞的细胞周期和细胞凋亡。Westem印迹试验结果表明PDD87对AKT信号转导通路没有明显的影响。对MEFI和MEFI/P ten一/一细胞中Y一氨基丁酸的含量进行了检测，发现后者补氨基丁酸含量较高，推测可能与夕泳绍夕基因的转录水平升高有关。 最后，我们利用蛋白质组学技术研究了MEFI和MEFI/P ten一细胞蛋白质表达谱的差异并鉴定了一些表达差异较大的蛋白。结果发现:铜锌一超氧化物歧化酶(euzn一soD)，过氧化物酶体膜蛋白20和peroxiredoxin6蛋白在MEFx伊ten-/-细胞中表达下降，而小分子量蛋白质酪氨酸蛋白酶和。。filinl蛋白在MEFI/Pte丫.细胞中表达增加。这些差异蛋白的鉴定为进一步深入了解PTEN的功能提供了一些线索。