【摘 要】
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目的多发性骨髓瘤相关骨病（MBD）是MM最重要并发症,发病机制目前尚不清楚,目前认为MM细胞是MBD发生的的始动因素和根本原因,破骨细胞介导的溶骨性损害是MBD发生的关键环节。前期研究发现血清IL-17A与MBD的临床分期有相关性,但是IL-17A是否与MBD发病相关目前尚不清楚,本研究旨在探讨IL-17A在MBD发病中的作用及其分子机制。研究方法1.细胞形态学观察及CCK-8实验:采用小鼠单核巨
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目的多发性骨髓瘤相关骨病（MBD）是MM最重要并发症,发病机制目前尚不清楚,目前认为MM细胞是MBD发生的的始动因素和根本原因,破骨细胞介导的溶骨性损害是MBD发生的关键环节。前期研究发现血清IL-17A与MBD的临床分期有相关性,但是IL-17A是否与MBD发病相关目前尚不清楚,本研究旨在探讨IL-17A在MBD发病中的作用及其分子机制。研究方法1.细胞形态学观察及CCK-8实验:采用小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7细胞）传代培养至生长对数期进行实验操作。用不同剂量的IL-17A干预RAW264.7细胞,观察其生长和形态学变化。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate Resistant Acid Phosphatase,TRAP）染色检测破骨细胞的分化,并计数TRAP阳性破骨细胞数。CCK-8实验检测不同剂量的IL-17A干预对RAW264.7细胞生长的影响。2.破骨细胞分化关键基因表达通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）检测破骨细胞分化关键因子TRAF6、c-Fos和NFATc1在RAW264.7细胞中的表达。3.破骨细胞分化关键蛋白表达水平检测用免疫印迹试验（Western blot）检测不同浓度IL-17A干预下破骨细胞转录关键节点相关蛋白的表达。结果1.在不同浓度IL-17A干预下,RAW264.7细胞形态逐渐发生变化,通过TRAP染色观察含有3个或3个以上细胞核的多核细胞增多,TRAP阳性细胞数明显增多,且表现为剂量依赖性,高浓度IL-17A刺激破骨细胞分化作用最显著。通过CCK-8实验可以发现不同浓度的IL-17A对RAW264.7细胞的增殖影响,100ug/L、50ug/L、0.5ug/L较对照组都明显升高,其中50ug/L对RAW264.7细胞促生长作用最明显。2.用IL-17A干预RAW264.7细胞后,通过q RT-PCR检测破骨细胞相关转录因子TRAF6、c-Fos、NFATc1基因表达均升高。3.Western blot检测IL-17A干预RAW264.7细胞后上述蛋白的表达也升高,50ug/L IL-17A对RAW264.7细胞破骨细胞相关信号的激活作用最明显。结论1.IL-17A在体外诱导并促进RAW264.7细胞分化为破骨细胞,促进细胞增殖能力。2.IL-17A促进TRAF6的高表达,上调下游信号破骨细胞分化关键因子c-Fos、NFATc1的表达,诱导RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化。
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