埃博霉素柱层析纯化工艺研究

来源 :齐鲁工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gggmtdh2009
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埃博霉素是一类由纤维堆囊菌代谢产生的大环内酯类次级代谢产物,并展现出了良好的抗肿瘤细胞活性。其作用机理与传统抗癌药物紫杉醇相似,因而在抗肿瘤药物的研发领域具有广阔的发展前景。埃博霉素的纯化是制约其走向市场的瓶颈之一。本论文针对高纯度埃博霉素的制备,采用3种技术手段对埃博霉素的分离进行了工艺研究。凝胶柱层析是一种分子筛过滤层析技术。本实验以埃博霉素粗提物为原料,研究了交联葡聚糖凝胶LH-20分离纯化埃博霉素的工艺,考察了多种工艺因素对埃博霉素分离纯化效果的影响。通过实验得到最佳分离条件为:洗脱剂一次洗脱为丙酮,二次洗脱为甲醇,流速为0.2mL/min,进样量埃博霉素A为1.0mg。在此条件下,得到埃博霉素A和B的纯度分别为90.27%和77.34%。离子交换层析通过目标物和树脂基团之间电荷的相互作用实现物质的分离。本实验同样以埃博霉素粗提物为原料,研究了离子交换树脂分离纯化埃博霉素的工艺,考察了多种工艺因素对埃博霉素分离纯化效果的影响。确定最佳分离条件为:选用D301弱碱阴离子交换树脂,样品溶液pH为5,吸附流速为1.5mL/min,洗脱剂为80%乙醇,洗脱流速为1.0mL/min。在此条件下,埃博霉素的纯度由不足10%提高至58.7%。埃博霉素的等温吸附规律可用Langmiur方程表示,吸附动力学规律可用Lagergren准一级动力学方程表示,表明D301树脂对埃博霉素的吸附特点是单分子层表面吸附。分子印迹技术通过印迹聚合物的选择性识别实现物质的分离。本实验首先研究了埃博霉素的结构类似物红霉素的印迹工艺。采用沉淀聚合法,优化后的工艺为:以n(红霉素):n(MAA):n(EGDMA)=1:4:15,乙酸乙酯为致孔剂。单位吸附量达到52.6mg/g。通过扫描电镜和红外谱图对聚合物进行表征。印迹聚合物的等温吸附规律可用Freundlich方程表示,吸附动力学规律可用Lagergren准二级动力学方程表示,表明该印迹聚合物对红霉素的吸附特点为多层吸附。然后通过CNST固体发酵,四氯化碳萃取和制备液相制备得到纯度超过99%的埃博霉素A,作为模板分子制备埃博霉素分子印迹聚合物。在埃博霉素A、红霉素和罗红霉素的混合溶液中,该聚合物表现出良好的选择专一性。初步证明分子印迹技术可以作为埃博霉素纯化的技术手段。
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