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脓毒症(sepsis)是感染引起的、以全身炎症反应综合征(systemic inflammatoryresponse syndrome, SIRS)为特征的、证实有细菌存在或有高度可疑感染灶的疾病,是外科重症监护室(Intensive Care Unit, ICU)的主要死亡原因。研究表明,ICU中约40%的患者患有脓毒症,病死率高达36%。近年来,脓毒症发病呈上升趋势,住院费用极昂贵,尚缺乏有效的救治手段。因此,寻找安全、有效、经济的救治策略具有十分重要的意义。高氧和麻醉浓度的异氟醚已经被证实对脓毒症动物有保护效应。氧气和异氟醚在临床上已被广泛应用,但高浓度氧长时间吸入会产生过量氧自由基,可能导致氧毒性的发生,而麻醉剂量的异氟醚会引起病人麻醉,重症病人不能耐受,因此,两者在临床应用会受到病人情况的限制。我们最近的研究表明,0.5最低肺泡有效浓度(minimum alveolar concentration, MAC)异氟醚复合60%氧吸入对酵母多糖所致小鼠脓毒症具有保护作用。因此,本课题采用临床公认的脓毒症模型---盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture, CLP)法诱导小鼠脓毒症及脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导离体细胞脓毒症模型,证实0.5MAC异氟醚复合60%氧吸入对脓毒症具有保护作用,并通过芯片研究说明miRNA调控的免疫炎症机制可能在其中发挥重要作用。材料与方法根据随机表法把雄性昆明小鼠(25-30g,无病原)随机分为6组,“脓毒症+空气”组、“脓毒症+100%氧气”组、“脓毒症+0.5MAC异氟醚+60%氧气”组、“假手术+空气”组、“假手术+100%氧气”组、“假手术+0.5MAC异氟醚+60%氧气”组。给予动物CLP诱导脓毒症模型,动物单纯开腹关腹作为对照模型。氧醚治疗:脓毒症模型制作后1h、6h分别给动物100%氧吸入或0.5MAC异氟醚复合60%氧气吸入1h;对照组动物吸入空气。CLP后连续7天观察各组动物存活率。取全血分离血清检测血生化指标、血清C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、血乳酸、炎症因子等指标,取心、肺、肝和肾各脏器,计算肺湿干比、观察各脏器病理损伤并进行病理评分。进行肺泡灌洗,检测肺蛋白渗出。提白细胞,检测白细胞miRNA表达谱。RAW264.7巨噬细胞系,随机分为6组,“脂多糖”组、“脂多糖+100%氧气”组、“脂多糖+0.5MAC异氟醚+60%氧气”组、“安慰剂”组、“安慰剂+100%氧气”组、“安慰剂+0.5MAC异氟醚+60%氧气”组。 LPS刺激诱导细胞脓毒症模型,脂多糖溶剂DMED培养基作为阴性对照。氧醚治疗:CLP后即刻给细胞100%氧或0.5MAC异氟醚复合60%氧环境处理。处理结束后收集细胞培养上清液、抽提细胞核蛋白和(或)取爬片的细胞,检测炎症因子及核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化。结果1.CLP后24h,脓毒症小鼠心、肺、肝和肾脏发生显著病理性改变,血乳酸和血生化水平显著高于对照组小鼠,血中炎症因子水平显著增高,7天存活率仅为40%。造模后1h和6h分别吸入1h的100%氧或0.5MAC异氟醚复合60%氧,可显著减轻CLP所致脓毒症小鼠各指标的异常变化。2.造模后不同时间点,脓毒症小鼠血中炎症因子发生显著异常。造模后1h和6h分别吸入100%氧或0.5MAC异氟醚复合60%氧1h,可显著改变CLP后小鼠miRNA表达谱。3.100ng/ml脂多糖刺激2h后,细胞炎症因子水平及NF-κB的活化显著高于对照组。100%氧或0.5MAC异氟醚复合60%氧处理可显著抑制炎症因子的异常变化及降低NF-κB的活化。结论综上所述,我们的实验结果证明,0.5MAC异氟醚复合60%氧气可能是通过miRNA调节的免疫炎性机制及抑制NF-κB的活化对脓毒症产生保护作用。