论文部分内容阅读
[目的]: 本实验利用非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠模型,在攻毒扶正的治疗原则指导下,从NASH形成的关键环节:脂代谢紊乱、细胞因子网络紊乱、肝细胞凋亡探讨清热解毒、养阴活血不同治法的作用及联合治疗意义,为临床辨证施治及防治NASH提供实验依据。 [方法]: 用高脂饲料与四氯化碳(CCl4)制备NASH大鼠模型,分别用乙肝清热解毒颗粒、乙肝养阴活血颗粒、辛伐他丁溶液进行灌胃。分为正常组、模型组、辛伐他丁组、清热解毒组、养阴活血组、清热解毒合养阴活血组(下称合方组)共6组,每组12只,实验第8周末取材。取肝脏组织常规石蜡包埋切片,HE染色,对各组大鼠肝脏脂肪变性及炎症活动度进行评分。心尖采血检测各组大鼠肝功能、血脂指标,放免法检测血清瘦素(Leptin)、胰岛素(INS)。制备肝组织匀浆,通过酶联免疫法测定肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素1β(IL-1β)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3),聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)含量。 [结果]: 1.通过NASH大鼠肝脏组织病变程度评分可见,模型组大鼠呈现严重的炎性细胞浸润和脂肪变性状态,与正常组相比差异显著(p<0.01)。各治疗组均在一定程度上改善炎性细胞浸润情况,抑制肝细胞脂肪变性。与模型组相比,养阴活血组有统计学差异(p<0.01),合方组在降低肝细胞脂肪变性上差异有统计学意义(p<0.05)。清热解毒组与辛伐他丁组与模型组相比差异无显著性。单用养阴活血治疗NASH大鼠炎性细胞浸润及改善脂肪变性程度上,均有显著性疗效(p<0.01)。 2.对各组大鼠肝功能分析,模型组与正常组相比,ALT、AST均有升高,但差异无显著性;中药治疗组对ALT、AST均有改善,养阴活血组、合方组差异有统计学意义(p<0.05);辛伐他丁组对肝功能的改善不明显。模型组TC明显升高(p<0.05),清热解毒组可明显降低TC水平(p<0.05)。从AST改善程度看,单用养阴活血有显著性疗效(p<0.01)。 3.各组大鼠瘦素和胰岛素水平明显升高。各治疗组降低血清瘦素水平效果明显(p<0.01)。辛伐他丁组能降低胰岛素水平,但差异无统计学意义。而中药治疗组均降低胰岛素水平,与模型组相比,合方组差异有统计学意义(p<0.01)。单用养阴活血在降低瘦素水平上有显著性疗效(p<0.01)。单用清热解毒、单用养阴活血均对下调胰岛素水平有显著性疗效(p<0.05,p<0.01),二方合用有很好的协同作用,可以提高疗效(p<0.05)。 4.模型组与正常组相比,Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ均有明显变化,差异有统计学意义(p<0.01);与模型组相比,清热解毒组与合方组均可降低TNF-α表达(p<0.01),提高IFN-γ表达(p<0.05),辛伐他丁组使IFN-γ水平升高,差异有统计学意义(p<0.01)。单用清热解毒组对调节TNF-α、IFN-γ均有显著性疗效(p<0.01);与正常组相比,模型组的Th2类细胞因子IL-4、IL-6水平均有明显升高(p<0.01),与模型组相比,辛伐他丁组、清热解毒组、养阴活血组均能有效降低IL-6水平(p<0.01),合方组可降低IL-4、IL-6含量,差异有统计学意义(p<0.01)。单用清热解毒对IL-4、IL-6均有显著性疗效(p<0.05,p<0.01)。二方合用有对IL-6的调节有很好的协同作用,可以提高疗效(p<0.01);通过对IFN-γ/IL-4的结果分析Th1/Th2类细胞因子总体水平,模型组与正常组相比,二者比值明显下降(p<0.01)。治疗组对IFN-γ/IL-4的比值进行上调。与模型组相比,辛伐他丁组、清热解毒组和合方组结果有统计学意义(p<0.05)。单用清热解毒、养阴活血均有显著性疗效(p<0.01,p<0.05)。 5.模型组与正常组相比,IL-1β、IL-18水平均有明显升高,差异有统计学意义(p<0.01)。治疗组均在不同程度上降低二者水平,中药组均可降低IL-1β水平,差异有统计学意义(p<0.05);辛伐他丁与中药组可降低IL-18水平(p<0.01)。二方合用对降低IL-18含量有很好的协同作用,可以提高疗效(p<0.01)。 6.模型组与正常组比较,Caspase-3、PARP均有明显升高(p<0.05),各治疗组有下调趋势,辛伐他丁组、养阴活血组可降低Caspase-3,差异有统计学意义(p<0.05);清热解毒组、养阴活血组及合方组明显降低PARP水平(p<0.01)。单独应用养阴活血对Caspase-3有显著性疗效(p<0.05)。单用清热解毒、养阴活血均对PARP有显著性疗效(p<0.01),二方合用有很好的协同作用,可以提高疗效(p<0.05)。 [结论]: 本研究结果表明,攻毒扶正法单方及合方均能减轻NASH模型大鼠肝组织脂肪变性及炎症反应、改善细胞因子网络紊乱、抑制肝细胞凋亡,其中清热解毒侧重调整细胞因子紊乱状态,养阴活血侧重减轻异常肝细胞凋亡,清热解毒与养阴活血联用在改善肝功能,降低血脂水平,降低胰岛素含量,调整IL-6、IL-18、PARP上疗效加强。提示攻毒扶正法对NASH具有确切的治疗作用,为运用攻毒扶正法治疗NASH提供了实验依据。