【摘 要】
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该论文采用植物优化密码子,根据它的氨基酸合成编码一条多肽链的spm(synthesized protein mondllin)基因.构建了大肠杆菌表达载体pBVspm,转化E.coliBL21,通过诱导,表达出具有
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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该论文采用植物优化密码子,根据它的氨基酸合成编码一条多肽链的spm(synthesized protein mondllin)基因.构建了大肠杆菌表达载体pBVspm,转化E.coliBL21,通过诱导,表达出具有甜味活性的蛋白质.该论文合成了由噬菌体P1 Cre重组酶介导的特异重组位点loxP的序列,构建了两个loxP同向重复的植物表达载体pGLX121.1.PCR定点突变了CaMV35S启动子元件中kozak序列,使kozak中的翻译起始密码子ATG位于NcoI位点上.把spm基因克隆到表达载体pGΩ4A的NcoI和PstI之间,给甜蛋白spm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件,然后克隆到pGLX121.1的EcoRI位点上,用农杆菌LBA4404转化烟草,获得卡那霉素抗性转基因植株,经过PCR及southern分析,证明甜蛋白spm基因已整合到烟草基因组内.用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因,证明了在35S启动子及其他调控元件的控制下,spm基因在转基因烟草中转录表达出mRNA.提取转基因烟草总蛋白,经SDS-PAGE分析,初步证明了spm基因在转基因烟草中表达出目的甜蛋白.
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