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恒河猴在形态学、生理生化特性和代谢方面与人类非常相似，其遗传基因与人类也有近98％的同源性。应用恒河猴猴进行实验研究的结果，容易推广于人类，因此早已作为生物医学领域研究的理想实验动物。近年来，随着器官移植中同种供器官源短缺问题的日益严重，异种器官移植又重新引起了人们的重视。肝脏是机体最主要的生物合成器官，其合成的凝血因子在维持机体血液循环中发挥着重要的作用。然而，在猪-恒河猴的肝移植模型中取得的成果，是否适用于人类，目前还不清楚。因此，有必要对恒河猴凝血系统的分子遗传背景作详细研究，以了解恒河猴凝血因子的结构和凝血机制，及其与人凝血因子的差异。为了检测恒河猴肝脏cDNA文库的基因表达特征，我们随机挑选401个恒河猴肝脏cDNA文库克隆进行3’端单向测序，获得393条有效EST序列，经拼接产生了221个Unigenes序列。Swissprot数据库比对发现有188个Unigenes序列与已知蛋白质匹配，其中16个Unigenes序列与已有的恒河猴蛋白质匹配，剩余的172个Unigenes序列中有171个与人类蛋白质高度同源。BLASTN比对显示，另外的33个Unigenes序列中，有26个Unigenes序列与已知恒河猴基因匹配，其余7个可能为恒河猴的新基因。dbEST和恒河猴基因组数据库比对结果表明Contig28、Singlet165、243为新发现的恒河猴EST序列。凝血因子IX和XI在凝血过程中都具有重要的作用，为了能够从分子水平研究恒河猴凝血因子IX和XI结构和功能，及其与人的匹配关系，我们采用PCR筛选法从恒河猴肝脏cDNA文库中克隆得到了凝血因子IX和XI的cDNA序列。序列分析结果显示，克隆得到了恒河猴FIX基因全长cDNA序列2668 bp；恒河猴FXI基因部分cDNA序列1646bp。恒河猴FIXcDNA序列已提交GenBank，获得基因序列登记号为：EU128170。我们利用生物信息学方法对克隆得到的恒河猴FIX cDNA和所编码的蛋白进行了初步分析。结果表明恒河猴FIX核酸序列与人FIX同源性为96．21％，蛋白质同源性为97.18％。该蛋白含有4个结构域，Gla、EGF1、EGF2和Trypsin，EGFl1四个物种中同源性最高的结构域，而EGF2在两者间差异最大，同源性只有92．31％。恒河猴和人的糖基化位点和数目基本一致，Cys位置和数目也高度保守。功能活性位点的比较显示恒河猴与人FIX具有相同的催化三联体和γ羧化谷氨酸位点。在重链序列中，形成底物结合槽的活性位点和大分子抑制物作用位点如autolysis loop、the99-100p，以及Ca2+结合区等在两者间都很相似。在FIX重链的模拟三维结构分析中，恒河猴和人的蛋白质构相也极为相似。以上结果提示，恒河猴FIX和人FIX可能具有同样的生理功能。此外，我们还初步探索了恒河猴FVⅡ的体外蛋白表达方法。成功构建了带有6His表达标签的毕赤酵母真核表达重组质粒pPIC-9K-MCFVⅡ和大肠杆菌原核表达重组质粒pET-DsbA-MCFVⅡ。在大肠杆菌原核表达系统中，目的蛋白主要以包涵体形式表达，但是在菌液上清和菌体裂解液中也能检测到可溶形式的目的蛋白。在毕赤酵母表达系统中，则未检测到明显的蛋白表达。因此，建立有效的恒河猴FVⅡ体外表达系统还需要进一步的实验研究。综上所述，本论文初步研究恒河猴肝脏cDNA文库的基因表达谱特征，鉴定得到了恒河猴3个新EST序列；克隆得到了重要的凝血因子FIX全长cDNA序列和FⅪ部分cDNA序列；通过生物信息学分析初步比较了恒河猴凝血因子FⅨ与人的差异；并对凝血因子FⅦ体外表达方法进行了初步探索，为今后研究恒河猴凝血系统的机制及其与人凝血系统存在的差异，以及进一步探索异种移植中凝血紊乱的分子机制和肝脏功能匹配问题奠定了基础。