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目的:
探讨人脐带间充质干细胞(huMSCs)对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)的增殖及杀瘤活性的影响。
方法:
分离正常人外周血单个核细胞,在细胞因子的作用下诱导获得CIK细胞,每2天计数细胞,流式细胞术检测CIK细胞免疫表型;培养正常人脐带间充质干细胞,流式细胞术测细胞免疫表型确定其为干细胞,以第4～5代的人脐带间充质干细胞为效应细胞,以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记的CIK细胞为靶细胞,以效靶比分别为1:1、1:10、1:20、1:40的比例共培养48小时后收集CIK细胞,单纯培养的CIK细胞为对照,流式细胞术测CIK细胞的增殖活性。将huMSCs与CIK细胞按1:1比例共培养48小时后收集CIK细胞,流式细胞术测定CIK细胞周期;以huMSCs作用的CIK细胞为效应细胞,单纯培养的CIK细胞为对照,肺癌细胞系LTPEP-2为靶细胞,MTT法检测各组细胞杀伤活性。
结果:
外周血单核细胞成功诱导CIK细胞;培养第21天的CIK细胞中CD3+CD8+细胞比例为(76.16±3.23)%,CD3+CD16+CD56+细胞比例为(28.43±1.51)%,而CD3+CD4+细胞比例降至(16.67±3.45)%。原代及第4代huMSCs均高表达CD73,CD90,CD105,不表达CD11b,CD45和HLA-DR,符合间充质干细胞的细胞免疫表型。huMSCs与CIK以1:1、1:10、1:20、1:40比例共培养48小时后,CFSE荧光M1比值分别为(88.85±1.32)%、(30.53±2.01)%、(12.42±1.56)%和(10.14±2.34)%,M1的比值随靶细胞数的增加而降低,各组间差异有显著性(P＜0.05)。将huMSCs与CIK细胞按1:1比例共培养48小时后,CIK细胞G1期细胞比例由(62.39±3.86)%升至(89.37±2.57)%,而S期细胞比例由(33.75±2.29)减少至(9.71±2.84)%,差异有显著性(P＜0.05)。在相同效靶比的情况下,CIK细胞的杀瘤活性由(50.87±6.32)%降至(29.82±8.52)%,差异有显著性(P＜0.05)。
结论:
huMSCs对CIK细胞的增殖活性有抑制作用,且呈剂量依赖性;huMSCs与CIK细胞以1:1比例共培养48小时后,CIK细胞的杀瘤活性降低。