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目的：探索不同浓度胰岛素对悬浮培养的拟胚体早期分化过程中心脏特异性基因时序性表达的影响。方法：本实验采用悬浮培养法使小鼠胚胎干细胞细胞(embryonic stem cell, ES cells)形成拟胚体(embryoid body,EB),并在体外持续培养11天,来模拟早期胚胎从内细胞团(Inner Cell Mass, ICM)向三胚层体系分化的过程。在EB培养基中加入不同浓度的胰岛素(60pM、6nM),分别于EB形成第1、3、5、7、9、11天提取mRNA,通过荧光定量PCR来检测心脏发育相关基因Gata4、 Mef2c、Tbx1、Lrrc10在EB中时序性表达的变化。结果：1.从形态上,EB在60pM组第5天即出现囊腔化趋势,第7天囊腔化更明显；而在6nM组EB第7天才出现囊腔化趋势,囊腔化趋势不明显,滞后于60pM组。2. Gata4是心脏细胞发育的早期标志基因,在胰岛素各组均有表达,其表达在60pM组第3天达到第一峰值,之后随时间延长而减弱,至EB培养第5天又稳步增加,在第7天达到第二峰值；而在6nnM组,Gata4表达明显延迟,在EB培养第5天达到第一个峰值,之后随时间延长逐渐减弱,至EB培养第7天又增加,在第9天达到第二峰值。3. Mef2c是心房心室均表达的心脏特异性基因。Mef2c的表达量在60pM组和6nM组中均随时间延长而增加,其表达峰值均位于EB培养第7天,但6nM组中第3、5、7、9天Mef2c的表达量较60pM组均低。4.Tbx1是第二生心区发育的标志性基因。Tbxl在60pM组的表达随着时间延长而增加,其表达峰值位于EB培养第7天,而Tbxl基因在6nM组的表达无明显高峰,且第1、3、7、9天Tbxl表达量均低于60pM组。5. Lrrc10是心脏环化的特异性基因。Lrrc10的表达在60pM及6nM组中均随时间延长而逐渐上调,至第9天达到高峰而后下调；但6nM组各阶段的表达量均低于60pM组。结论：1.不同浓度胰岛素可影响心脏发育相关标志基因Gata4、Mef2c、 Tbx1、Lrrc10的表达,与6nM浓度的胰岛素组相比,60pM浓度的胰岛素有利于拟胚体心脏发育相关标志基因的表达。2.在相同胰岛素浓度下,随培养时间的不同,Gata4、Mef2c、 Tbx1、Lrrc10基因表达水平不同,其中Gata4于第3天达首个高峰,第7天达第二个高峰,Mef2c、Tbx1于第7天达高峰,Lrrc10于第9天达高峰,提示心脏发育相关基因的表达呈时序性变化。