论文部分内容阅读
目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma, PPARγ)激动剂局部应用对鼠角膜的影响,判断其药物毒性。方法将PPARγ激动剂DK2配制成滴眼液,将0.1%,0.5%,1.0% PPARγ激动剂局部滴用于Wistar大鼠右眼,观察眼局部改变和荧光素钠染色情况,并按照制定的眼部刺激反应评分标准,评判其对眼部刺激性,并行角膜病理组织切片染色和ELISA检测房水PPARγ浓度,综合评价药物安全性。结果药物各组鼠眼部刺激反应评分均为1-3分,角膜切片HE和免疫组化染色示角膜结构完整,细胞无损伤浸润。ELISA测得给药后房水中PPARγ浓度明显增加,且PPARγ的表达具有浓度依赖性,但0.5%,1.0%两个给药组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.0%浓度的PPARγ激动剂DK2滴眼液对鼠眼无刺激,具有安全性。目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma, PPARγ)激动剂对大鼠角膜移植排斥反应的影响。方法SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,建立SD-Wistar大鼠同种异体穿透性角膜移植模型。随机分A、B、C、D及E组,其中A组：对照组,术后予以无菌生理盐水点眼；B组：0.1%DK2滴眼液组；C组：1.0%DK2滴眼液组；D组：DK2口服灌胃给药组；E组：1.0%环孢霉素A(CsA))滴眼液组；F组：Wistar大鼠自体同基因移植对照组,术后生理盐水点眼。术后定期对各组角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿、新生血管3项指标作为临床评估标准,记录排斥指数(RI)、新生血管指数(NI)、植片存活时间。实时定量荧光PCR检测鼠角膜内ICAM-1mRNA表达,流式细胞学检测各组大鼠颌下淋巴结MHC-Ⅱ、CD80的变化情况,免疫组织化学法检测大鼠颌下淋巴结CD86的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鼠房水中IL-10的含量。结果A-E组的角膜植片平均存活时间为9.2±1.5d、10.1±1.8d、18.3±1.1d、20.1±1.6d、18.1±1.5d,F组植片存活时间至观察期结束(>28.0d)。除B组外,其他用药组植片存活时间与A组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。C、E组植片存活时间两两比较差异无统计学意义(P>0.05),D组植片存活时间与C组相比较有统计学差异。术后第9d角膜植片ICAM-1 mRNA显示,A、B组相对表达量明显高于C、D、E、F组；颌下淋巴结免疫指标检测,流式细胞学结果显示第9 dC、D、E组DC表面MHC-Ⅱ及CD80单阳性表达率低于对照A,B组(P<0.05)；免疫组化染色显示,第9d时A、B组淋巴结高表达CD86,而C、D、E、F组未见有明显表达,至术后18d,C、D、E组CD86表达明显增加。ELISA检测术后第3、9、18天各组大鼠房水IL-10含量较低,各组平均含量无明显差异；第9 d后,随着排斥反应发生延迟,C、D、E组IL-10含量较A、B组增加,但变化幅度不大。结论PPARγ激动剂能显著延长大鼠角膜植片的存活时间,其抑制角膜移植免疫排斥反应具有随浓度增加效应,并且全身用药效果强于局部滴用1.0%DK2滴眼液和1.0%环孢霉素A。PPARγ激动剂能有效抑制角膜植片炎性细胞浸润和ICAM-1 mRNA的表达,抑制局部淋巴结内树突状细胞的聚集和递呈功能,可能是其发挥抗排斥作用机制的一部分。目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma, PPARγ)激动剂对体外诱导培养的大鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化成熟及免疫活性影响,探讨药物对DCs表达TLR4的影响。方法用GM-CSF和IL-4体外定向诱导Wistar大鼠骨髓细胞分化成树突状细胞,①分别加入两种不同的PPARγ激动剂DK2和马来酸罗格列酮,与细胞共培养12-72h后,MTT法检测树突状细胞生长抑制率,乳酸脱氢酶检测法(LDH)比较两种药物的药效；②细胞随机分成4组,即空白对照组,阳性对照组(脂多糖,LPS),低浓度药物组和高浓度药物组,倒置显微镜下观察DCs形态变化,流式细胞仪检测DCs表面免疫分子MHC-Ⅱ、CD80表达率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DCs培养上清液中IL-10含量,混合淋巴细胞增殖反应(MLR)测定DCs刺激T淋巴细胞增殖能力的改变,实时定量PCR检测PPARγmRNA表达；③免疫荧光染色法检测药物对TLR-4表达的影响。结果①MTT结果显示两种PPARγ激动剂DK2和马来酸罗格列酮的IC50值分别为15.60±0.54μmol/L和53.8±1.94μmol/L,此时的LDH释放率分别为16.8%和27.4%。②经DK2干预后,流式细胞仪检测DC表面MHC-Ⅱ、CD80阳性率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA显示LPS刺激后IL-10的含量增加,药物干预后表达量进一步增加,各组差异有统计学意义(P<0.05)。MLR实验显示随着刺激细胞(DC)浓度下降,反应T细胞增殖能力随之下降,并且药物能降低T细胞增殖能力,差异有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR结果显示脂多糖刺激后,DCs表达PPARγmRNA略有增加,加入DK2后,PPARγmRNA表达量随药物浓度增加而进一步增加,差异有统计学意义(P<0.05),PPARγ受体拮抗剂能抑制DK2的激动作用。免疫荧光检测示DK2抑制DCs表达TLR4。结论PPARγ激动剂DK2能抑制大鼠DC分化成熟及其免疫功能,抑制效率具有浓度依赖性。目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma, PPARγ)激动剂对角膜新生血管的抑制作用及机制。方法36只SD大鼠随机分成A、B、C及D组,每组9只大鼠,右眼为实验眼。B、C、D组大鼠行角膜囊袋法制作角膜新生血管模型。A组：空白对照组,正常大鼠角膜；B：阳性对照组,制作模型后生理盐水滴眼；C、D组：建模后分别滴用0.1%、1.0% PPARY激动剂滴眼液,均4次／d,共28d。裂隙灯显微镜下测量新生血管面积,Western-Blot检测角膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达。结果D组大鼠角膜新生血管面积小于阳性对照B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05),而C组与B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Western-Blot检测新生血管角膜表达VEGF明显增强,C、D组VEGF相对量有不同程度下降。结论局部应用PPARγ激动剂能有效抑制角膜新生血管生成,抑制VEGF的合成和分泌可能是阻止角膜新生血管生长机制的一部分。