背景：　　血友病是临床上常见的遗传性出血性疾病，常见的有血友病甲和血友病乙，病因为F8基因或F9基因的突变导致相应的凝血酶原活性降低或缺失,根据凝血因子FVI因子和FIX因子的活性浓度，可以分为轻型（>5％)、中型（1%?5%)和重型（<1%)。血友病是一种以自发性出血倾向或创伤后出血不止为明显特征的疾病，常见的受累组织包括粘膜，肌肉，皮下，关节和重要脏器等，影响病人的日常活动，因病致残造成活动受限，严重者甚至会危及生命。血友病甲和血友病乙是伴X染色体遗传疾病，常常表现为女性携带，而在男性发病，女性很少有发病的报道，血友病甲发病率在男性约为1/5000，血友病乙在男性发病率约为1/30000，因为我国人口基数大，据估计我国约有10万血友病病人，而且其中绝大部分人因病致残、因病致贫，生活捉襟见肘，其生存现状不容乐观。有希望能够彻底治愈血友病的基因治疗还处于临床实验阶段，暂时常规的治疗是替代治疗和对症支持治疗，这并不能彻底治愈疾病。　　目的：　　为了防止新的血友病患儿的出生，阻断致病基因的传递而进行对携带者和孕妇产前的基因诊断，减少血友病患儿的出生率，通过对血友病的病人、怀疑携带血友病致病疾病基因的病人或有血友病家族史的怀孕女性的基因诊断，能够做到早期诊断、早期预防、减少血友病患儿出生。血友病甲的基因F8庞大并且突变种类繁多，单一的基因诊断技术对血友病甲的诊断率并不高，内含子22倒位和内含子1倒位是F8基因的突变热点，内含子22倒位约占重型血友病甲病人的一半左右，内含子1倒位约占重型血友病甲5%。通过对常见突变热点的检测，在未发现倒位的病人进行F8基因测序，找到问题位点。测序过程怀疑有外显子缺失的病人，通过多重连接探针扩增技术验证。血友病乙的基因F9相对F8较小，突变热点不突出，所以选用直接测序技术进行检测，对怀疑有外显子缺失的病人，选用多重连接探针扩增技术进行验证。通过对血友病甲和血友病乙的病人基因诊断，完善血友病甲和血友病乙的基因诊断技术，提高血友病甲和血友病乙的病人基因诊断率。　　方法：　　对20名血友病甲病人进行基因诊断，首先采用LD-PCR方法检测病人F8基因内含子22倒位的突变，凝胶成像技术对产物进行分析；选用序列特异性PCR进行检测病人中内含子1倒位的患者，凝胶成像技术对产物进行分析；对于内含子倒位阴性的患者采取直接PCR测序技术，对F8基因26个外显子和外显子与内含子交界区进行扩增，与正常序列进行对比，发现问题位点；对前三步检测阴性的病人进行多重连接探针扩增技术（multiplexligation-dependentprobeamplification,MLPA)进行检测，确认是否有大片段缺失。　　对4名血友病乙病人进行基因诊断，采用直接PCR测序技术，对F9基因启动子、8个外显子和外显子与内含子交界区进行扩增，通过与正常序列对比，发MLPA　　结果：　　20例血友病甲患者，共检出内含子22倒位8例，内含子1倒位1例，错义突变5例，插入突变1例，大片段缺失1例，剪切突变4例。4例血友病乙患者检测出错义突变2例，缺失伴插入突变1例，大片段缺失突变1例。其中新发现血友病甲突变3例(c.1009+2C>T,c.670+1G>C,c.4798delA)，血友病乙突变1例（c.938_939delinsT)。　　结论：　　在该研宄中，通过联合多种基因诊断技术，对血友病甲和血友病乙的基因诊断率达到100%。