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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease virus, FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。在动物感染或免疫过程中,抗口蹄疫病毒有效免疫应答的标志都是高度亲和性及高水平的特异性中和抗体。抗体水平越高,保护率越高。McCullough等根据口蹄疫免疫抗体滴度将其分为三个区：白色区,即抗体滴度高,易感动物对口蹄疫病毒感染完全保护；黑色区,即抗体滴度低,易感动物在口蹄疫病毒感染后全部发病；灰色区,即抗体水平介于白色区和黑色区之间,动物在口蹄疫病毒感染后部分保护。但引起免疫抗体灰色区的机制至今尚未有相关报道。本实验通过研究口蹄疫灭活疫苗免疫抗体灰色区猪的免疫水平差异,初步探索引起口蹄疫免疫抗体灰色区的因素。实验选取60头口蹄疫抗体阴性猪,分为三组,每组20头,分别免疫O型口蹄疫灭活疫苗1头份、1/3头份、1/9头份剂量,在免疫后第28天,检测免疫猪抗体效价,血清中细胞因子IL-10、IL-12、TNF-α水平及外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3-CD8+T、CD21+细胞亚群比例；同时进行1000ID50同源强毒攻击,确定口蹄疫免疫抗体灰色区范围。结果表明口蹄疫灭活疫苗免疫猪第28天,LPB-ELISA抗体效价1：6～1：45,为口蹄疫免疫抗体灰色区,与马军武确定的猪O型口蹄疫疫苗免疫抗体灰色区范围一致。此外,免疫抗体水平与疫苗抗原量呈相关,在疫苗免疫剂量范围内,抗原含量高,抗体水平越高。在口蹄疫免疫抗体灰色区,免疫后第28天保护和不保护猪的血清IL-10、TNF-α水平变化均不显著,保护猪IL-12水平升高极显著(P<0.01),不保护猪的水平升高不显著(P>0.05)；保护猪外周血CD21+细胞亚群比例升高且差异极显著(P<0.01),CD3+CD4+T细胞比例水平升高显著(P<0.05),CD3+T, CD3+CD8+T细胞亚群比例变化不显著(P>0.05),而不保护猪CD21+、CD3+T细胞亚群比例变化不显著(P>0.05),CD3+CD4+T细胞比例降低且差异显著(P<0.05),CD3+CD8+T细胞亚群比例降低且差异极显著(P<0.01)；实验表明口蹄疫免疫抗体灰色区内,血清IL-12水平、外周血CD21+细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞亚群比例是决定其保护力的影响因素。采用A型口蹄疫灭活疫苗对32头口蹄疫抗体阴性猪进行免疫,免疫后第28天进行1000ID50同源强毒攻击,确定了A型口蹄疫免疫抗体灰色区在1：6～1：22之间。此外,我们对实验组9头猪免疫A型口蹄疫灭活疫苗,在免疫后第28天加强免疫,二免后第10天同源强毒攻击,并检测一免后第3、5、7、14、28,二免后第10天,攻毒后3、6、9天免疫猪细胞因子IL-4、L-10、TNF-α和淋巴细胞亚群水平。结果发现,一免后,血清中IL-10在免疫后第3天达到峰值,IL-4、TNF-α在一免后第5天达到峰值,随后降低,二免后第10天,IL-4水平未检测到,IL-10、TNF-α水平与免疫后第28天相比,变化均不显著。免疫猪同源强毒攻击后,血清中IL-4仍未检测到,IL-10在免疫后第3天达到峰值,TNF-α在免疫后第9天达到峰值。CD21+细胞比例在一免后升高不显著,二免后第10天,CD21+细胞比例升高；CD3+、CD3+CD4+T细胞亚群在一免后第7天升高,随后降低显著,二免后第10天其水平下降,但差异不显著；CD3+CD8+T细胞亚群在一免后升高不显著,二免后第10天升高；攻毒后,非免疫猪CD21+、CD3+T、CD3+CD4+T、 CD3+、CD8+T细胞的急剧降低；免疫猪CD21+、CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞亚群比例降低缓和,且恢复更加快速。