目的:探索兔脂肪组织中分离、培养及鉴定干细胞的方法;观察体外长期培养对新西兰大白兔脂肪间充质干细胞(Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs)的基本生物学性状及定向改良诱导分化为软骨细胞的能力。方法:在无菌条件下从雄性大白兔颈部区取皮下脂肪组织约5～10g,I型胶原酶消化后,1500r/min离心10min,待细胞长满瓶底80%时用2.5g/L胰蛋白酶消化,按1:3比例传代培养、鉴定,至第3代时加入软骨诱导培养基14d后通过免疫荧光和RT-PCR对其相关表型进行检测,阿新蓝染色及II型胶原免疫组织化学检测脂肪间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化。结果:兔脂肪间充质干细胞形态:原代及传代的兔脂肪干细胞均呈长梭形或多边形贴壁生长,生长分化活跃。兔脂肪间充质干细胞的生长曲线:传代的兔脂肪间充质干细胞生长曲线呈“S”形。新西兰大白兔脂肪组织分离培养出的细胞经流式细胞仪检测CD44、CD49d表达阳性,CD45表达阴性。加入软骨诱导培养基定向诱导72h后,细胞生长缓慢,由长梭形逐渐变成圆形,并渐渐有软骨结节形成,胞浆中出现棕色颗粒,细胞表面有较多伪足,具备正常细胞器结构。诱导分化2周后,荧光免疫检测有特异软骨基质Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的表达, RT- PCR检测显示有Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox- 9 mRNA的表达,阿新蓝染色及II型胶原免疫组织化学检测阳性。结论:新西兰大白兔脂肪组织能够分离培养出脂肪干细胞,兔源性脂肪干细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,在体外具有生长稳定,增殖较快的特点,生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,能向软骨细胞分化,在体外长期培养后,其一般生物学性状可保持稳定。