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目的:采用不同浓度的曲古抑菌素A(TSA)作用于人胰腺癌细胞PANC-1,从细胞形态结构、抑制率及凋亡率来研究TSA对人胰腺癌细胞PANC-1的凋亡诱导作用,并通过检测不同浓度TSA作用PANC-1细胞后存活细胞内凋亡、转移相关基因和Notch通路表达的变化,探讨TSA诱导PANC-1细胞凋亡机制以及对存活细胞的影响。
方法:通过倒置显微镜和Hoechst33258染色观察TSA作用后PANC-1细胞的形态学改变;MTT比色法检测TSA对PANC-1细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术Annexin(Ⅴ)-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;荧光PCR方法检测肿瘤凋亡相关基因(survivin、c-myc、p53、bcl-2、bax)、转移相关基因(MMP1、MMP2)以及Notch通路相关基因的改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内bcl-2、bax、caspase-3、E-Cadherin,vimentin;细胞免疫化学和蛋白免疫印迹法两种方法检测Notch受体胞内区(NICD)。
结果:TSA显著抑制人胰腺癌细胞PANC-1生长,并且具有浓度时间依赖性,MTT比色法显示随着TSA浓度增加和作用时间的延长,对PANC-1细胞的增殖抑制作用亦逐渐增强;Hoechst33258染色和Annexin(Ⅴ)-FITC/PI检测发现PANC-1细胞的凋亡率随着TSA浓度增加而逐渐增多;荧光PCR结果显示,经TSA处理后,存活的PANC-1细胞内Notch通路相关基因以及与凋亡、转移相关的基因在mRNA水平有显著改变;Western Blot检测示,TSA可以上调Bcl-2,caspase-3,vimentin和NICD蛋白的表达;相反,Bax和E-Cadherin表达下调。
结论:
(1) TSA具有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,并具有浓度时间依赖性。
(2)TSA具有诱导胰腺癌细胞PANC-1凋亡的作用,并具有浓度依赖性。
(3)经TSA处理后,存活的胰腺癌细胞内转移相关基因的上调、Notch通路的活化可能与TSA作用不足时PANC-1细胞产生药物抵抗有关。