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本文分析了三种E3泛素连接酶,Nrdp1、March4和Rnf115的分子结构特征,研究了这些基因的组织表达谱及其在大黄鱼免疫反应中的表达,应用酵母双杂交研究了Nrdp1的互作蛋白。结果如下:(1)大黄鱼Nrdp1基因(Lc Nrdp1)的cDNA全长1248 bp,ORF为957 bp,编码318个氨基酸,其编码蛋白主要结构包括N-端的环指结构、中间的B-box结构和C-端的螺旋卷曲3个结构域,分子量约为36.16 KDa。Real-time PCR分析发现,Nrdp1广泛表达在大黄鱼的脑、心脏、鳃、肝脏、脾脏、肾脏、头肾、胃、肠、皮肤、肌肉和血液组织中,其中脑表达丰度最高。用孵化2 h内的刺激隐核虫感染大黄鱼,采集6h、12h、1d、2d、3d和5d的样品,Real-time PCR检测在鳃、皮肤、脾和肾中的的表达。结果表明:Nrdp1在鳃、皮肤和脾脏中表达出现显著上调(P<0.05),且都在刺激后12h表达量达到最高值;在头肾中Nrdp1基因的表达量下降。酵母双杂交实验表明,Nrdp1与MyD88、TBK1之间存在着相互作用。腹腔注射PBS、LPS、poly I:C和副溶血弧菌,采集3h、6h、12h、24h、48h和72h的样品,Real-time PCR检测Nrdp1和TBK1在肝脏、脾和肾感染前后的表达情况。结果表明:在肝脏、脾脏和头肾中,LPS组Nrdp1表达量均有上调,且分别在48h、24h和72h达到最高值;poly I:C和副溶血弧菌组在肝脏和脾脏表达有上调;LPS组TBK1在肝脏和脾脏中表达量上调,poly I:C组在肝脏和脾脏中表达有上调,且都在12h达到最高值;副溶血弧菌组在肝脏、脾脏和头肾中都有表达上调,分别在12h、48h和72h达到最高值。(2)大黄鱼March4基因(Lc March4)cDNA全长1440 bp,ORF长1203 bp,编码400个氨基酸,蛋白分子量约为43.42 KDa,其蛋白为两次跨膜蛋白,中间包含一个锌指结构域。LcMarch4广泛表达在所检测的上述12个组织中,脑部含量最高。刺激隐核虫感染后,鳃中Lc March4基因的表达量第1天显著下调,其它各个时相均显著上调(P<0.05);脾脏中第1天和第2天表达量下降,其它时相表达显著上升P<0.05);皮肤中各个时相都呈现上调表达,而头肾中则仅在第2天上调表达,其余时间呈显著下调表达。LPS刺激后,在肝脏、脾脏和头肾中表达量均有上调,分别在48h、24h和48h出现最大值;poly I:C和副溶血弧菌刺激后脾脏和头肾中Lc March4均上调表达,poly I:C刺激后分别在3h和48h达到最高值,副溶血弧菌刺激后分别在48h和3h达到最高值。(3)大黄鱼RNF115(LcRNF115)基因cDNA全长为1571 bp,ORF为888 bp,编码295个氨基酸,蛋白质分子量32.2 KDa。LcRnf115基因表达产物广泛存在于所检测的组织中,在肌肉中表达量最高。刺激隐核虫感染后,LcRnf115基因的表达变化与LcNrdp1相似,在鳃、皮肤和脾脏中表达量均显著上调(P<0.05),而在头肾中的表达受到抑制;LPS和poly I:C刺激后,在肝脏、脾脏和头肾中表达量均上调;后者分别在72h、3h和3h达到最高值;副溶血弧菌刺激后在脾脏和头肾中表达上调,分别在6h和3h达到最高值。上述研究结果表明,大黄鱼Nrdp1、March4和Rnf115在刺激隐核虫、细菌(副溶血弧菌)和病毒感染的免疫应答过程中可能发挥重要的作用。