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目的:通过对秦岭柴胡有效化学物质基础—柴胡皂苷a的含量测定和相关生药学研究,为秦岭柴胡药材质量标准的制订提供科学依据;同时,通过对其主要药效学的实验研究,探讨其药用价值。拟为秦岭柴胡生药鉴定和资源开发利用研究奠定基础。
方法:采用HPLC梯度洗脱法,用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈:水二元梯度洗脱[0~5min(30∶70);5~10min(40∶60);10~18min(60∶40);平衡5 min],检测波长为210nm,分别测定秦岭柴胡根部和地上部分中柴胡皂苷a含量。采用性状鉴别、薄层鉴别、理化鉴别、显微鉴别等鉴别方法分别对秦岭柴胡根部和地上部分进行检视;同时分别考察秦岭柴胡根部和地上部分的浸出物含量。分别以秦岭柴胡根部和地上部分药材65%醇提取液为实验药液,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌为实验菌株,采用平板二倍稀释法统计最小杀菌浓度(MBC);以试管二倍稀释法统计最小抑菌浓度(MIC)。并考察秦岭柴胡根部提取液对内毒素所致家兔体温的影响。
结果:柴胡皂苷a在0.699~4.66μg之间线性关系良好,r=0.9999,秦岭柴胡根部柴胡皂苷a平均回收率为99.05%,RSD为1.36%;秦岭柴胡地上部分柴胡皂苷a平均回收率为97.42%,RSD为1.42%;秦岭柴胡根部浸出物平均值为12.44%,地上部分浸出物平均值为5.24%。抗菌实验表明秦岭柴胡根部提取液对大肠杆菌MIC=9.12mg/ml、MBC=73mg/ml;对金黄色葡萄球菌MIC=18.25 mg/ml、MBC=73mg/ml;对绿脓杆菌MIC=18.25 mg/ml、MBC=73mg/ml。秦岭柴胡地上部分提取液对大肠杆菌MIC=306mg/ml;对金黄色葡萄球菌MIC=153mg/ml;对绿脓杆菌MIC=153 mg/ml,但地上部分提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭作用不明显,仅呈现出一定的抑菌趋势。同时秦岭柴胡根部各剂量组均能不同程度的降低发热家兔的体温,在部分时段具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
结论:秦岭柴胡皂苷a的HPLC梯度洗脱法灵敏、准确,专属性强,重现性好;薄层鉴别等定性鉴别方法和浸出物测定方法简便可行,操作性强,其定性、定量方法可作为秦岭柴胡质量标准的研究方法;秦岭柴胡药效学实验证实秦岭柴胡具有较强的抗菌和解热作用,药用价值较高,其资源开发利用前景看好。