论文部分内容阅读
目的：研究双花颗粒对正常小鼠及不同高脂血症动物模型血脂的影响,并观察双花颗粒对高脂血症大鼠脂质过氧化、脂质代谢、血液流变学、肝组织病理学变化及肝脏LDLR, PPARy蛋白表达的影响,以探讨双花颗粒的调脂作用及其分子学机制,为将其开发为新的中药保健品提供主要保健功能研究依据。方法：1.双花颗粒对正常小鼠血脂的影响40只小鼠随机分为4组,双花颗粒3个剂量组分别为22.5 g·kg-1,11.3 g·kg-1和5.6 g·kg-1 (分别为人体推荐量的60,30,15倍,下同),给药体积为10 mL·kg-1,每天1次,空白组灌胃等体积纯化水。连续给药3 w后取血,分离血清测定TC,TG,HDL-C值。2.双花颗粒对蛋黄乳致急性高脂血症小鼠血脂的影响60只小鼠按体重随机分为正常组、模型组、脂必妥2g·kg-1组及双花颗粒22.5g·kg-1,11.3 g·kg-1,5.6 g·kg-1组,每组10只,连续给药3w(正常和模型组均灌胃纯化水),每周称重一次。第20 d给药后5 h,除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射75%蛋黄乳20 mL·kg1,禁食过夜(不禁水)10 h后,各组再给相应药物1次,2h后分离血清测定TC,TG和HDL-C值。3.双花颗粒对Triton WR-1339诱发的内源性高脂血症小鼠血脂的影响60只小鼠随机分为6组,分组给药方法同2,其中阳性药为洛伐他汀0.0033g·kg-1.连续给药3w(正常和模型组均灌胃纯化水),每周称重一次。末次给药1h后腹腔注射Triton WR-1339 400 mg·kg-1,诱发内源性高脂血症。18h后取血,测定血清TC, TG, HDL-C和LDL-C值。4.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠血脂代谢及其相关基因表达的影响60只雄性大鼠随机分为6组：正常组、模型组及洛伐他汀0.02 g·kg-1组、双花颗粒7.5 g·kg-1,3.8 g·kg-1,1.9 g-kg-1组(分别为人体推荐量的20,10,5倍)。给药同时,除正常组外,其余5组均喂饲高脂饲料(78.8%基础饲料,10%猪油,10%蛋黄粉,1%胆固醇,0.2%3号胆盐),连续给药7 w。实验结束前3d将各组大鼠单独置于代谢笼内,收集72 h粪便,用于测定粪便中脂质含量。末次给药后禁食12h,股动脉取血,分别测定血清TC, TG, HDL-C, LDL-C, MDA, SOD, NEFA, LPL, HL, LA及肝脏TC, TG, HDL-C, LDL-C水平。另取4 mL抗凝血进行血液流变学相关检测,取部分肝左叶进行冰冻切片,HE染色后观察肝脏病变,采用WesternBlot法检测肝脏LDLR, PPARy的蛋白表达。结果：1.双花颗粒对正常小鼠血清TC, TG, HDL-C的影响与空白组比较,双花颗粒22.5,11.3,5.6 g·kg-1均能明显降低血清TG水平(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性趋势,随剂量减少而作用增强,对TC, HDL-C水平无明显影响(P>0.05)。2.双花颗粒对蛋黄乳致急性高脂血症小鼠血清TC, TG, HDL-C的影响结果显示,造模后模型组小鼠血清TC, TG, HDL-C水平明显高于正常组(P<0.01),表明蛋黄乳致急性高脂血症模型复制成功。与模型组相比,双花颗粒11.3,5.6g·kg-1剂量组TC水平明显降低,具有显著性差异(P<0.01),对TG, HDL-C水平无显著影响(P>0.05)。3.双花颗粒对Triton WR-1339诱发的内源性高脂血症小鼠血清TC, TG, HDL-C, LDL-C的影响模型组小鼠血清TG, TG, LDL-C较正常组显著升高(P<0.01),提示内源性高脂血症模型复制成功。与模型组比较,双花颗粒22.5 g·kg-1能显著降低LDL-C水平(P<0.05)。双花颗粒各剂量组对TC, TG均无显著性影响(P>0.05)。4.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠血清TC, TG, HDL-C, LDL-C的影响SD大鼠喂饲高脂饲料后,血清TC, LDL-C异常升高,HDL-C明显下降,与正常组大鼠比较,差异显著(P<0.01),表明食饵性高脂血症大鼠模型复制成功。与高脂模型组相比,双花颗粒7.5 g·kg-1能显著降低高脂血症大鼠血清TC, LDL-C水平(P<0.01),3.8 g·kg-1显著降低LDL-C水平,升高HDL-C值(P<0.05)。表明双花颗粒能够改善高脂血症大鼠血脂水平,进而预防高脂血症的发生和发展。5.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠肝脏TC, TG, HDL-C, LDL-C的影响高脂模型组大鼠肝脏TC,TG水平较正常组大鼠明显增加,具有显著性差异(P<0.05)。与高脂模型组相比,双花颗粒1.9 g·kg-1能显著降低高脂血症大鼠肝脏TC,TG, LDL-C水平,升高HDL-C值(P<0.05,P<0.01),7.5 g·kg-1显著增加HDL-C水平(P<0.05)。表明双花颗粒能够改善高脂血症大鼠肝脏脂质水平。6.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠血清SOD, MDA, NEFA的影响高脂模型组大鼠与正常组大鼠比较,血清MDA, NEFA含量明显升高,SOD活性显著降低(P<0.01),表明食饵性高脂血症大鼠模型伴有自由基脂质过氧化损伤。与高脂模型组比较,双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1均能显著升高血清SOD水平(P<0.01),降低NEFA值(P<0.05,P<0.01),其中7.5,3.8 g·kg-1 MDA水平显著降低(P<0.01)。提示双花颗粒具有抗脂质过氧化作用,能抑制高脂血症大鼠血清NEFA水平的异常升高。7.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠血清LPL, HL, LA活性及粪便脂质含量的影响高脂饲料喂食大鼠后,血清LPL, LA酶活性显著降低(P<0.01)。与高脂模型组比较,双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1均能显著升高高脂血症大鼠血清LPL,LA酶活性(P<0.01),其中3.8,1.9 g·kg-1亦能显著升高HL水平(P<0.05,P<0.01)。高脂模型组大鼠粪便脂质含量较正常组大鼠明显增加(P<0.01),双花颗粒7.5,3.8,1.9g.kg-1组大鼠粪便脂质含量与高脂模型组比较均无显著性差异(P>0.05)。8.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠全血粘度、全血还原黏度、血浆黏度的影响高脂模型组大鼠全血粘度、全血还原黏度和血浆粘度较正常组大鼠均有明显升高(P<0.05,P<0.01),表明食饵性高脂血症大鼠伴有血液流变学的改变。与高脂模型组相比,双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1与洛伐他汀均能显著降低全血粘度、全血还原黏度(P<0.05,p<0.01),其中双花颗粒7.5,3.8 g·kg-1亦能显著降低血浆粘度(P<0.05,P<0.01)。9.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠HCT, IEA, IER, IED的影响与正常组大鼠比较,高脂模型组大鼠IEA, IER明显增加(P<0.01),IED显著降低(P<0.01),表明食饵性高脂血症大鼠血液成分流变特性的异常,显示造模成功。与高脂模型组比较,双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1与洛伐他汀均能显著降低IEA和IER水平(P<0.05,P<0.01),而对HCT和IED改善不明显(p>0.05)。10.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠肝组织病理学变化的影响肉眼可见：正常组大鼠肝脏颜色鲜红,质地柔软,富有弹性；高脂模型组大鼠肝脏呈奶油黄色,体积明显增大,边缘变钝,质地变软,切面略带油腻感,呈典型脂肪变；洛伐他汀与双花颗粒1.9g·kg-1组大鼠肝脏色泽、质地较高脂模型组有明显改善,色微黄。其他组大鼠肝脏体积、色泽与模型组接近。光镜检查发现：正常组大鼠肝小叶结构清晰,肝细胞索状排列,肝窦无扩张或狭窄,肝细胞核居中,胞浆丰富,HE染色胞浆红染。食饵性高脂模型组大鼠肝窦明显狭窄,HE染色肝细胞体积增大,胞浆浅染,有的透亮,细胞内存在较多脂滴,表现为严重的弥漫性脂变。双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1剂量组肝细胞索状排列,肝窦无明显狭窄,胞浆浅染,但细胞内脂滴较细小,大多数动物肝脏脂变程度较轻。经x2检验,双花颗粒1.9 g·kg-1组及洛伐他汀组大鼠肝脏与高脂模型组比较脂变程度减轻,具有显著性差异(P<0.05)。11.双花颗粒对食饵性高脂血症大鼠肝脏LDLR, PPARy蛋白表达的影响与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝脏LDLR, PPARy蛋白表达明显下降,具有显著性差异(P<0.01),表明造模成功。双花颗粒7.5,3.8,1.9 g·kg-1均能显著促进高脂血症大鼠肝脏LDLR, PPARy蛋白的表达,与高脂模型组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论：双花颗粒能有效预防急性、内源性及食饵性高脂血症的形成。同时,双花颗粒不仅能提高机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化物的产生,而且能纠正高脂血症引起的血液流变学异常,提高LPL, HL, LA酶活性,对粪便中脂质排泄则无显著影响。提示双花颗粒的调脂机理不是通过增加脂质排泄来实现,可能与其抗脂质过氧化、改善血液流变性、提高LPL,HL, LA酶活性有关,其分子作用机制可能与其提高肝脏LDLR, PPARy的蛋白表达有关。