体外血—视网膜内屏障建立及冰片促灯盏乙素透屏障的作用研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ssfdlah
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目的:观察不同比例冰片对灯盏乙素在体外血-视网膜内屏障的促透作用。方法:1.完成高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)检测灯盏乙素药物浓度的方法学开发和验证;2.体外培养大鼠视网膜血管周细胞和内皮细胞,并用transwell建立视网膜内皮细胞和周细胞内屏障模型;3.在体外血-视网膜内屏障模型的上室中给予含有不同比例冰片的灯盏溶液,分时段提取透屏障后的HBSS液。4.采用HPLC-MS/MS检测透屏障的下室HBSS液中灯盏乙素浓度,分析冰片促进灯盏乙素透过血-视网膜内屏障的作用。结果:1.自建HPLC-MS/MS检测灯盏乙素的方法特异性好,准确度、灵敏度高,各项方法学验证均符合2015版《中国药典》第四部中《9012生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求。2.建立体外血-视网膜内屏障模型成功。3.在体外周细胞屏障模型中,上室灯盏乙素浓度为0.1mg/ml,在2h后,上室中未添加冰片的下室中灯盏乙素药物透过浓度为14720ng/ml;在上室添加冰片浓度分别为0.06mg/ml、0.12mg/ml、0.24mg/ml、0.48mg/ml的下室中灯盏乙素药物浓度分别为15160ng/ml、22605ng/ml、21170ng/ml、23415ng/ml。在冰片浓度为0.48mg/ml时,下室中的灯盏乙素的能达到最大浓度为23415ng/ml。4.在体外内皮细胞屏障模型中,上室灯盏乙素浓度为0.1mg/ml,在2h后,上室中未添加冰片的下室灯盏乙素药物透过浓度为8820ng/ml,上室添加冰片分别为0.06mg/ml、0.12mg/m、0.24mg/ml、0.48mg/ml的下室中的灯盏乙素药物浓度分别为9505ng/ml、9570ng/ml、11305ng/ml、12000ng/ml。在冰片浓度为0.48mg/ml时,下室中灯盏乙素的能达到最大浓度为12000ng/ml。结论:1.灯盏乙素在HBSS中的含量检测方法学验证成功。2.冰片可能具备促进灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障模型的作用3.在上室的冰片药物浓度达到0.48mg/ml时,灯盏乙素透过体外血-视网膜内屏障模型达到最大药物浓度。
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