苹果树腐烂病是由黑腐皮壳属(valsa ceratosperma)真菌引起的一种枝干病害,俗称烂皮病,该病轻时造成枝干溃疡腐烂,严重时可导致整树枯死。苹果树腐烂病的普遍发生和严重危害,给苹果产业带来了巨大损失,其原因与病菌的侵染致病过程不明、发病规律不清导致的防治不力关系极大,揭示腐烂病菌侵染致病过程是揭示病害发生规律和防治的基础,具有非常重要的理论和实际意义。前人的组织学研究由于研究方法、病菌种类、树皮组织难于加工等原因,研究结果不一致甚至相互矛盾,使人们至今对于苹果树腐烂病菌在寄主组织内的扩展行为还缺乏深入系统的了解。本研究通过组织学半薄切片的方法,分别观察在人工接种和自然发病条件下,苹果树腐烂病菌在树皮组织内的扩展情况,以期明确苹果树腐烂病菌在树皮内的扩展规律,为进一步研究分生孢子的侵染致病过程奠定基础。得到以下结果:1、田间自然发病条件下,取正在扩展、表现典型腐烂症状的树皮病斑组织(隆起、红褐色、软腐、酒糟味),通过半薄切片,甲苯胺蓝染色观察发现,病菌菌丝主要分布于皮层和韧皮部。皮层和韧皮部组织受到破坏,离析、崩解。根据大量切片观察结果推测,病菌可能先在韧皮部定殖,再向皮层组织扩展;病健交界部位(约0.3 cm)的切片观察发现,菌丝多分布在病斑组织的皮层和韧皮部中,健康组织一侧也有少量的菌丝分布;距离病斑0.5 cm的健康组织中,皮层和韧皮部中均没有观察到菌丝的存在。在有菌丝存在的病组织中,组织形态松散,寄主细胞解离。2、离体枝条叶痕接种苹果树腐烂病菌(菌饼),在接种后3 d,即可在接种部位观察到腐烂病斑出现,接种后5 d病斑即可扩展出接种点以外2~3 cm;离体枝条烫伤接种分生孢子悬浮液,接种后4 d即可观察到腐烂病斑出现。而离体枝条表面无伤接种苹果树腐烂病菌(菌饼和分生孢子悬浮液),均未发病,说明病菌的入侵需要伤口或入侵部位存在大量坏死组织。3、接种后5 d,分别取病斑(表现明显腐烂症状)、病健交界(约0.3 cm)和距离病斑0.5 cm(没有显示腐烂症状)的部位,半薄切片后经甲苯胺蓝染色,观察病菌菌丝的分布情况。结果表明,病斑部位的皮层组织中有大量菌丝定殖扩展;病健交界部位也观察到菌丝的存在。距离病斑0.5 cm的组织中没有观察到菌丝的存在。在有菌丝存在的部位,菌丝周围的寄主组织崩溃、细胞坏死;接种后20 d左右,可在病斑部位观察到分生孢子器的产生。对产孢组织的半薄切片观察发现,病菌菌丝在皮层和韧皮部中大量聚集,并侵入木质部导管。4、离体枝条烫伤伤口接种苹果树腐烂病菌分生孢子悬浮液,接种后4 d,分别取病斑、病健交界和距离病斑0.5 cm的部位,半薄切片后经甲苯胺蓝染色观察,发现病菌菌丝主要在寄主的皮层和韧皮部中扩展,病健交界和距离病斑0.5 cm的部位,在皮层、韧皮部以及木质部中均没有发现菌丝的存在。菌丝存在的病斑部位,其周围的几层寄主细胞离析。接种后20 d左右,病斑部位即可形成分生孢子器,产孢部位半薄切片观察发现,菌丝在皮层、韧皮部和木质部导管中均有分布。在菌丝大量聚集的皮层和韧皮部中,寄主组织受到破坏,细胞离析、坏死。