【摘 要】
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通过观察食管癌细胞经过X线照射后不同时间点DNA修复基因的表达变化,探讨这些DNA修复基因在放射抵抗形成中的作用。食管癌亲代细胞系Seg-1经放射线反复照射(2Gy/次,总剂量达
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通过观察食管癌细胞经过X线照射后不同时间点DNA修复基因的表达变化,探讨这些DNA修复基因在放射抵抗形成中的作用。食管癌亲代细胞系Seg-1经放射线反复照射(2Gy/次,总剂量达到60Gy)建立稳定放射抗性表型的细胞系Seg-1R。然后提取亲代及抵抗细胞系照射前(0h)和照射后不同时间点(8h, 24h)的总RNA,应用Illumine Human-6 V3芯片筛选差异基因,通过聚类分析Seg-1和Seg-1R的3个样本(未照射细胞样本、照射后8h细胞样本和照射后24h细胞样本)的基因表达相似程度,并通过Gene Ontology分析找到与DNA修复有关的基因,分析这些基因在照射后不同时间点表达变化趋势,并用RT-PCR进行验证。食管癌细胞系(Seg-1和Seg-1R)经X线照射后24h细胞样本均和未照射细胞样本的基因表达情况接近,而照射后8h细胞样本基因表达差异性大;应用基因芯片筛选的亲代细胞系和放射抵抗细胞系的表达差异基因主要涉及信号转导、细胞周期、磷酸化和DNA修复等多个细胞生物学功能;通过Gene Ontology分析,一共找到5个与DNA修复有关的差异基因,其中3个基因(SLK、HMGB1和PMS1)不但在Seg-1和Seg-1R间表达差异显著,而且在照射后不同时间点的表达变化趋势也有明显差异,经RT-PCR验证与芯片结果基本一致。放射敏感细胞Seg-1和放射抵抗细胞Seg-1R,经X线照射24h后基因表达基本恢复到未照射水平,而照射8h后基因表达还处于变化期,和未照射水平相比差异较大; PMS1基因可能在食管癌细胞放射抵抗形成机制中发挥重要作用。
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