【摘 要】
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目的:通关藤提取物（Marsdenia tenacissima extract,MTE）具有抗肿瘤作用,其机制不明,通关藤苷H（Tenacissoside H,TDH）是MTE中的一种化学成分。本文旨在探讨TDH抗人结肠癌LoVo细胞增殖和迁移、诱导凋亡的作用及机制,探索TDH干扰LoVo细胞中高尔基磷蛋白3（Golgi phosphorylated protein 3,GOLPH3）基因表达和细
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目的:通关藤提取物（Marsdenia tenacissima extract,MTE）具有抗肿瘤作用,其机制不明,通关藤苷H（Tenacissoside H,TDH）是MTE中的一种化学成分。本文旨在探讨TDH抗人结肠癌LoVo细胞增殖和迁移、诱导凋亡的作用及机制,探索TDH干扰LoVo细胞中高尔基磷蛋白3（Golgi phosphorylated protein 3,GOLPH3）基因表达和细胞信号通路活性的作用。方法:1.用不同浓度（0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL）TDH处理人结肠癌LoVo细胞24h、48h和72h,MTT法检测LoVo细胞活力。2.细胞分组:（1）对照组:人结肠癌LoVo细胞;（2）TDH组:经TDH处理的LoVo细胞;（3）实验组1:经TDH和PI3K/AKT/m TOR信号通路激动剂IGF-1处理的LoVo细胞;（4）实验组2:经TDH和Wnt/β-catenin信号通路激动剂Wnt agonist 1处理的LoVo细胞;（5）空载组:转染p-CMV-2空载质粒的LoVo细胞;（6）GOLPH3组:转染p-CMV-2-GOLPH3重组质粒的LoVo细胞;（7）实验组3:经TDH处理的转染空载质粒的LoVo细胞;（8）实验组4:经TDH处理的过表达GOLPH3重组质粒的LoVo细胞。3.构建重组质粒p-CMV-2-GOLPH3,采用脂质体转染法,分别将p-CMV-2-GOLPH3重组质粒以及p-CMV-2空载质粒转染到人结肠癌LoVo细胞,Western Blot法检测转染效果。4.Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;5.Transwell法检测细胞迁移能力;6.Western Blot法检测p70S6K、p-p70S6K、β-catenin、GOLPH3蛋白的相对表达量。结果:1.随着TDH的浓度增加,TDH对LoVo细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈浓度依赖效应;作用时间在72h内无明显的时间依赖效应;TDH在24h、48h和72 h对LoVo细胞抑制的IC50分别为:40.24μg/mL、13.00μg/mL、5.73μg/mL。2.TDH组的细胞凋亡率显著高于对照组,而实验组1、实验组2细胞凋亡率明显低于TDH组,差异有统计学意义（P<0.05）;3.TDH组的细胞迁移数明显低于对照组,而实验组1、实验组2细胞迁移数明显高于TDH组,差异有统计学意义（P<0.05）;4.与对照组相比,TDH组中p-p70S6K/p70S6K蛋白表达量比值、β-catenin、GOLPH3的蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）,实验组1中p-p70S6K/p70S6K蛋白表达量比值和实验组2中β-catenin蛋白的相对表达量较TDH组明显增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。5.GOLPH3组中GOLPH3蛋白的相对表达量明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）;与实验组3对比,实验组4中p-p70S6K/p70S6K蛋白表达量比值、β-catenin、GOLPH3蛋白的相对表达量明显增多,差异有统计学意义（P<0.05）;6.实验组3的细胞凋亡率显著高于空载组,而实验组4的细胞凋亡率显著低于实验组3,差异均有统计学意义（P<0.01）;7.实验组3的细胞迁移数较空载组显著降低,而实验组4的细胞迁移数显著高于实验组3,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论:1.TDH可明显抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖,呈浓度依赖效应。2.TDH可明显抑制人结肠癌LoVo细胞的迁移,诱导其凋亡。3.在LoVo细胞中过表达GOLPH3基因可拮抗TDH诱导凋亡及抑制迁移的作用。4.TDH通过下调GOLPH3蛋白表达,抑制PI3K/AKT/mTOR、Wnt/β-catenin信号通路活性,从而发挥抗结肠癌的作用。
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