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一、研究背景与目的DEPTOR作为mTORCl及mTORC2内源性抑制因子,在调控mTOR信号通路活性起重要作用。研究发现在多种肿瘤中DEPTOR的表达被下调,如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、慢性髓系白血病,这使得mTOR信号通路处于过度激活状态而促进肿瘤生长。然而在部分多发性骨髓瘤中DEPTOR却意外的处于过表达状态,DEPTOR的高表达可抑制mTOR通路的活性,通过负反馈机制最终导致Akt的活化,促进多发性骨髓瘤细胞的存活。目前,已有两篇文章报道了DEPTOR与食管癌预后的关系。其中一研究结果显示:DEPTOR在食管鳞癌患者中的表达上调,并提示患者较短的生存期。然而,另一研究结果表明:DEPTOR的表达在食管鳞癌中下调,并提示较差的预后。根据这两组研究的结论提示我们,DEPTOR在食管癌中的表达量及其在预测食管鳞状细胞癌(ESCC)预后中的作用,仍未定论,存在一定的争议。我们本次实验的目的在于:1、确定DEPTOR在食管癌中的表达情况,及其对食管鳞状细胞癌预后的影响。2、DEPTOR对食管鳞状细胞癌化疗反应的影响。二、研究方法1、在南方医院胸外科收集23例食管癌标本,将标本分为两部分,一部分进行组织固定,包埋、切片及免疫组化染色,观察DEPTOR蛋白在组织中的表达部位以及表达水平;另一部分组织标本研磨并提取蛋白,采用免疫印迹的方法检测方法检测DEPTOR蛋白在组织中的表达水平。2、于上海芯超公司购买组织芯片2套,共含180例食管癌标本。进行免疫组化染色,对DEPTOR的染色结果进行评分,并做生存期分析。3、选取4种食管癌细胞系,1种永生化正常食管上皮细胞系,采用免疫印迹的方式,检测该5种细胞中DEPTOR的表达水平,并根据DEPTOR的表达水平,以永生化正常食管上皮为参考,进行分类。4、对4种食管癌细胞,培养过程中加入化疗药物,采用CCK-8的检测方式,观察4种食管癌细胞的存活情况。对4种食管癌细胞进行干扰和过表达,降低和升高DEPTOR在细胞中的表达水平,并加入化疗药物,探究DEPTOR表达水平的变化,对细胞化疗敏感性的影响。5、利用免疫印迹方式,探究DEPTOR影响食管癌细胞化疗敏感性的具体分子机制。三、研究结果我们的研究结果显示DEPTOR在肿瘤组织中的表达显著增加,并且在早期ESCC患者中提示较高的生存率。体外研究显示,可根据正常食管鳞状上皮细胞系HET-1A中的DEPTOR表达量,将ESCC细胞系分为相对高和低DEPTOR表达的亚群。在我们的研究中,不同水平的DEPTOR表达影响着食管癌细胞系对化疗药物的反应。在相对低表达的细胞系中,DEPTOR通过降低Akt活性增加化疗敏感性。在相对高表达的细胞系中,DEPTOR通过在下调核糖体蛋白S6激酶(S6K)后负反馈激活IRS1-P13K-Akt-Survivin通路,从而增加细胞的化疗耐药。